皂荚抗心肌缺血活性成分筛选及机理研究

论文摘要

本课题根据中医理论对心肌缺血及心绞痛病因病机的认识,基于已有研究基础,以传统中药皂荚为研究对象,采用现代药理学、植物化学及分子生物学研究方法,深入探讨皂荚抗心肌缺血物质基础、活性成分的生物利用度及其作用机理。结果表明:1.皂荚总皂苷具有抗心肌缺血作用,其水解产物皂荚总皂苷元具有更强的药理活性,结合肠道菌群代谢理论及血清药理学相关研究提示皂荚总皂苷元为皂荚总皂苷体内抗心肌缺血的主要活性部位。2.皂荚总皂苷元主要由刺囊酸及齐墩果酸组成,二者经静脉注射给药均能产生良好的抗心肌缺血作用,且强度相当。提示皂荚抗心肌缺血的物质基础为刺囊酸及齐墩果酸。3.建立高效液相测定血浆样品中刺囊酸含量的方法,该方法稳定可行,操作简便,线性范围宽,定量限达到46ng/ml,满足生物利用度研究需要。4.采用CaCo-2细胞模型及大鼠体内生物利用度研究方法比较了刺囊酸及刺囊酸钠盐的生物利用度,结果显示,刺囊酸钠盐生物利用度明显高于刺囊酸。5.在整体动物、细胞、基因水平对刺囊酸抗心肌缺血作用进行研究,结果表明刺囊酸抗心肌缺血作用与增强心肌耐缺氧能力、保护心肌细胞、抗氧化及抑制心肌细胞凋亡有关。综上,本论文深入阐明了皂荚抗心肌缺血的有效成分,并对刺囊酸的生物利用度及作用机理进行探索性研究,为中药皂荚在心肌缺血治疗专面提供了重要的实验依据,也为皂荚的开发利用及临床应用提供了重要参考。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词
• 前言
• 1 研究背景
• 2 立题依据
• 3 实验设计思路
• 4 实验流程
• 实验研究
• 第一部分 实验样品的制备
• 1 实验材料
• 1.1 药材与试剂
• 1.1.1 药材
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 对照品
• 1.2 仪器
• 2 实验方法与结果
• 2.1 皂荚总皂苷的制备及含量测定研究
• 2.1.1 皂荚总皂苷制备流程
• 2.1.2 皂荚总皂苷的制备
• 2.1.3 皂荚总皂苷的含量测定
• 2.2 皂荚总皂苷元的制备、分离纯化及含量测定研究
• 2.2.1 皂荚总皂苷元制备研究
• 2.2.2 皂荚总皂苷元的分离纯化
• 2.2.3 皂荚总皂苷元分离成分的结构鉴定
• 2.2.4 皂荚总皂苷元的含量测定
• 2.3 刺囊酸和齐墩果酸的制备与检测
• 2.3.1 刺囊酸和齐墩果酸的制备
• 2.3.2 刺囊酸和齐墩果酸的含量测定
• 2.4 刺囊酸钠的制备及检测
• 2.4.1 刺囊酸钠的制备
• 2.4.2 刺囊酸钠的鉴别
• 2.4.3 刺囊酸钠的含量测定
• 3 小结
• 第二部分 皂荚抗心肌缺血活性成分筛选
• 1 实验材料
• 1.1 药物与试剂
• 1.2 实验动物
• 1.3 主要仪器
• 1.4 统计学方法
• 2 实验方法与结果
• 2.1 抗心肌缺血动物模型的选择
• 2.2 皂荚总皂苷及总皂苷元抗心肌缺血作用筛选
• 2.2.1 口服GSN及GSG对ISO致大鼠心肌缺血模型的影响
• 2.2.2 口服GSN及GSG对PIT致大鼠心肌缺血模型的影响
• 2.3 刺囊酸及齐墩果酸抗心肌缺血作用筛选
• 2.3.1 刺囊酸及齐墩果酸体外溶血作用考察
• 2.3.2 静注刺囊酸及齐墩果酸对ISO致大鼠心肌缺血模型的影响
• 2.3.3 静注刺囊酸及齐墩果酸对PIT致大鼠心肌缺血模型的影响
• 3 小结
• 第三部分 刺囊酸生物利用度研究
• 1 实验材料
• 1.1 药物与试剂
• 1.2 实验动物
• 1.3 细胞株
• 1.4 主要仪器
• 2 实验方法与结果
• 2.1 刺囊酸及刺囊酸钠在CaCo-2细胞模型中的转运研究
• 2.1.1 CaCo-2细胞模型的建立
• 2.1.2 CaCo-2细胞模型的验证
• 2.1.3 刺囊酸及钠盐在CaCo-2细胞模型中的吸收差异研究
• 2.2 刺囊酸的口服生物利用度研究
• 2.2.1 刺囊酸色谱条件考察
• 2.2.2 血清预处理方法考察
• 2.2.3 内标的选择
• 2.2.4 阴性干扰考察
• 2.2.5 刺囊酸标准曲线及校正曲线的建立
• 2.2.6 刺囊酸测定方法的加样回收率考察
• 2.2.7 刺囊酸测定方法的精密度
• 2.2.8 刺囊酸及刺囊酸钠的血药浓度测定
• 2.2.9 刺囊酸及刺囊酸钠口服生物利用度参数考察
• 2.3 刺囊酸及钠盐的口服生物利用度验证研究
• 2.3.1 口服EA、EANa对ISO致大鼠心肌缺血模型的影响
• 2.3.2 口服EA、EANa对PIT致大鼠心肌缺血模型的影响
• 2.3.3 口服EA、EANa对心肌缺血小鼠耐缺氧能力的影响
• 3 小结
• 第四部分 刺囊酸抗心肌缺血作用机制研究
• 1 实验材料
• 1.1 药物与试剂
• 1.2 实验动物
• 1.3 主要仪器
• 2 实验方法与结果
• 2.1 刺囊酸对心肌耗氧量的影响
• 2.2 刺囊酸对心肌细胞保护作用研究
• 2.2.1.乳鼠心肌细胞的培养
• 2.2.2 刺囊酸对乳鼠心肌细胞增殖敏感浓度筛选
• 2.2.3 刺囊酸对ISO致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
• 2O₂致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用'>2.2.4 刺囊酸对H₂O₂致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
• 2S₂O₄致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用'>2.2.5 刺囊酸对Na₂S₂O₄致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
• 2.3 刺囊酸对缺血心肌组织生化指标的影响
• 2.4 刺囊酸对Caspase-3,Bcl-2基因表达水平的影响
• 2.4.1 大鼠心肌缺血模型的复制与评价
• 2.4.2 总RNA的提取与定量
• 2.4.3 EA对缺血心肌中Caspase-3 mRNA表达水平的影响
• 2.4.4 EA对缺血心肌中Bcl-2 mRNA表达水平的影响
• 3 小结
• 讨论
• 1.中医对“心痛”病因病机的认识
• 2.抗心肌缺血活性筛选模型的选择
• 3.皂荚抗心肌缺血活性成分跟踪
• 4.生物利用度评价研究
• 5.大鼠口服药物生物利用度评价
• 6.刺囊酸抗心肌缺血作用机理探讨
• 结论
• 问题与展望
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果