叶下珠中叶下珠素的提取纯化工艺研究

论文摘要

本研究以叶下珠为研究对象,建立了叶下珠中叶下珠素的高效液相色谱法（HPLC）检测方法,同时采用HPLC测定不同产地和不同部位的叶下珠药材中叶下珠素含量;对叶下珠中叶下珠素的提取与分离纯化工艺进行了较深入而系统的研究,确定了工艺流程和分离纯化条件,同时对纯化的叶下珠素单体进行了质谱鉴定。主要研究内容如下:HPLC定量检测叶下珠素的含量。确定液相色谱条件为:色谱柱C18（250mm×4.6mm,5um）,检测波长230nm,柱温30℃,进样量20μL,流速0.8mL/min,以甲醇—水（80:20）为流动相等梯度洗脱。在此液相条件下,叶下珠样品液中五种组分得到较好地分离。叶下珠素在2.72μg/mL—136μg/mL浓度范围内线性关系良好。HPLC测定不同产地和（广西,南宁）不同部位叶下珠药材中叶下珠素含量。结果表明,海南产叶下珠中叶下珠素含量最高为0.664%,广西次之（0.565%）,广东,湛江为（0.178%）,其他产地叶下珠素含量均较低。不同部位以叶中含量最高（1.04%）,果实（0.03%）、茎（0.02%）、枝（0.018%）、根（0.01%）中含量都很低。叶下珠中叶下珠素的提取工艺研究。乙醇超声法提取,进行单因素试验和正交试验,确定最佳提取工艺参数。结果表明,影响叶下珠素提取效率的各因素主次顺序是:乙醇浓度＞液料比＞提取时间,提取温度的影响高度显著。最佳提取工艺参数为:乙醇浓度95%,液料比25,提取时间20min,重复提取两次,叶下珠素含量为0.687%。叶下珠素的纯化工艺研究。比较HPD100、HPD100A、HPD700等七种大孔树脂对叶下珠素的吸附分离特性,确定选择HPD100大孔树脂。较优纯化条件为:上样流速为1BV/h,选择80%乙醇为洗脱溶剂,洗脱流速为2BV/h,洗脱液用量约为9BV,在该条件下叶下珠素纯度从9.47%提高到55.2%通过硅胶柱层析纯化叶下珠素粗产品得到纯度为83%,选择石油醚对叶下珠素粗品进行重结晶得到了纯度为96.79%。对纯化的叶下珠素单体进行了质谱鉴定,结果表明纯化所得晶体与叶下珠素标准品质谱图基本一致。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 1 叶下珠的研究概况
• 1.1 叶下珠的形态特征和资源
• 1.2 叶下珠化学成分研究
• 1.3 叶下珠药理作用的研究
• 2 叶下珠中木脂素类成分研究概述
• 2.1 木脂素类化合物的药理作用
• 2.2 叶下珠中木脂素类成分的分离纯化研究
• 2.3 叶下珠素的化学合成研究
• 2.4 叶下珠中木脂素的定性定量研究
• 3 研究目的意义与研究内容
• 3.1 研究目的意义
• 3.2 研究内容
• 第二章 高效液相色谱法测定叶下珠素含量研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 检测波长的确定
• 3.2 叶下珠素HPLC色谱条件的确立
• 3.3 叶下珠素的定性分析
• 3.4 标样标准曲线的绘制
• 3.5 稳定性、精密度、重复性和加样回收率试验
• 3.6 样品测定
• 4 讨论
• 第三章 叶下珠素提取工艺研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 提取溶剂的选择
• 3.2 提取方法的选择
• 3.3 确定超声提取工艺中单因素对叶下珠素提取的影响
• 3.4 最佳提取工艺参数的确定
• 4 讨论
• 第四章 大孔树脂纯化叶下珠素工艺研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 主要试验仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 大孔吸附树脂的静态吸附-解吸附实验结果
• 3.2 树脂静态吸附动力学曲线
• 3.3 吸附等温线的测定
• 3.4 动态吸附-解吸附的研究
• 3.5 中型号柱的洗脱工艺试验
• 4 讨论
• 第五章 叶下珠素粗产品的硅胶柱纯化与重结晶
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 硅胶柱色谱分离结果
• 3.2 产品的结晶
• 3.3 所得晶体的质谱分析
• 4 讨论
• 第六章 结论及创新点
• 1 结论
• 2 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历
• 在读期间发表的论文