鸡源志贺菌在感染雏鸡体内的动态分布

论文摘要

鸡源志贺菌可引起鸡的腹泻痢疾、血便,重者引起死亡,耐过鸡消瘦和生长发育迟缓。鸡志贺菌病作为鸡的一种新发传染病,常被误诊为鸡白痢或鸡球虫病等,给该病防治造成很大困难,结果导致了严重的经济损失。迄今为止,对于鸡源志贺菌感染的体内过程和致病机制缺乏足够的了解,影响了该病的防控,故需要更加深入了解鸡源志贺菌的致病过程和致病机理。研究细菌在动物机体的动态分布,是了解疾病的发生发展过程的最好手段。因此,要掌握鸡源志贺菌的致病过程需要首先了解该菌在感染雏鸡体内的动态分布。本试验先建立了鸡源志贺菌的PCR检测方法,然后以实验雏鸡人工感染鸡源志贺菌,建立鸡志贺菌病病理模型,采用细菌分离鉴定及PCR检测两种方法对鸡源志贺菌在实验感染雏鸡体内的动态分布进行了研究,揭示了鸡志贺菌病的发生发展过程和致病机理,为鸡志贺菌病的流行病学调查、诊断和防治提供理论依据。研究结果如下:1.本试验针对志贺菌属的侵袭性抗原基因ipaH建立了可用于检测鸡源志贺菌的PCR检测体系。试验结果显示,该PCR检测体系特异性强、灵敏度高,最低检测限为126cfu/mL。将该PCR检测方法应用于临床样本中鸡源志贺菌的检测,将大大缩短检测时间,提高检测准确率,为预防和控制鸡志贺菌病提供技术手段。2.根据本试验对感染雏鸡体内鸡源志贺菌的动态分布检测结果,攻毒后6h就可以在心血、肝、脾、肺、肾、十二指肠中检测到鸡源志贺菌,在攻毒后不同时间点,各脏器鸡源志贺菌的检出情况不同。攻毒后第7d未在雏鸡体内分离到鸡源志贺菌。从细菌分布的整体情况看,鸡志贺菌病病程在攻毒后的第2d达到感染最高峰,之后逐渐向健康转归。肝脏、脾脏、肾脏是鸡源志贺菌的主要定植器官,而鸡源志贺菌在心脏、肺脏和十二指肠内的分布具有一定的个体差异。在以后的诊断工作中,采集肝脏、脾脏、肾脏进行鸡源志贺菌检测更有针对性,可以减少工作量。3.根据对感染雏鸡直肠肠内容物的鸡源志贺菌检测结果,在雏鸡感染后6 h,即可在雏鸡粪便中检出鸡源志贺菌,直至感染后第2 d。雏鸡的排菌情况具有个体差异,只能在个别雏鸡体内检测到,检出率较低。鸡源志贺菌活菌经粪便排出病雏体外污染环境,与病雏鸡共同饲养的健康雏鸡可通过消化道受感染。4.将用细菌分离鉴定法和PCR检测法得出的感染雏鸡体内鸡源志贺菌分布情况进行比较可见:将传统增菌培养与PCR方法结合检测样品中鸡源志贺菌,其检出率比细菌分离法高。在临床上,直接用PCR方法检测病料增菌液中的鸡源志贺菌,可以节省诊断时间,为及时治疗提供保障。

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• 1 文献综述
• 1.1 志贺菌的病原学特性
• 1.2 志贺菌的致病性和免疫性
• 1.3 志贺菌的毒力相关基因
• 1.4 志贺菌的流行病学情况
• 1.5 志贺菌检测方法
• 1.6 志贺菌毒力基因的检测稳定性
• 1.7 病原体在动物体内的分布研究概况
• 1.8 本研究的目的和意义
• 试验一 鸡源志贺菌PCR 检测方法的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 试验用菌株
• 1.2 主要仪器设备
• 1.3 主要试剂及配制方法
• 1.4 引物
• 1.5 PCR 检测方法
• 1.6 特异性试验
• 1.7 灵敏度测定
• 2 结果与分析
• 2.1 特异性试验
• 2.2 灵敏度测定
• 3 结论与讨论
• 试验二 鸡源志贺菌在感染雏鸡体内的动态分布研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验用菌株
• 1.2 试验动物及分组
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 主要试剂及配制方法
• 1.5 细菌纯化
• 1.6 攻毒试验
• 1.7 样品采集及增菌培养
• 1.8 样品中鸡源志贺菌的分离鉴定
• 1.9 用 PCR 方法直接检测增菌液中鸡源志贺菌
• 2 结果与分析
• 2.1 细菌纯化结果
• 2.2 攻毒菌液浓度检测
• 2.3 临床症状观察
• 2.4 试验雏鸡病理剖检
• 2.5 组织增菌培养
• 2.6 组织中鸡源志贺菌的分离鉴定
• 2.7 PCR 方法直接检测组织增菌液的鸡源志贺菌
• 3 结论与讨论
• 全文总结
• 参考文献
• ABSTRACT