耐酸性反刍兽月形单胞菌构建及对瘤胃微生物发酵的影响

论文摘要

本研究无菌采取健康奶牛瘤胃液,按照乳酸杆菌分离鉴定的方法步骤,利用乳酸杆菌分离培养基SL培养基,共筛选出8株瘤胃内耐酸的乳酸杆菌,通过形态学特征及生物化学反应特性分析,并对其进行16S rRNA基因扩增、测序,经BLAST与GenBank数据库进行同源性分析对其进行鉴定,通过耐酸性试验,最终获得一株能在pH值3.24条件下生存的耐酸能力强的乳酸杆菌-粘膜乳杆菌。对本实验室保存的反刍兽月形单胞菌K6及分离鉴定的粘膜乳杆菌lm4208进行了菌株生长曲线绘制,确定了粘膜乳杆菌lm4208及反刍兽月形单胞菌K6的对数生长期,粘膜乳杆菌lm4208对数生长期为412h,反刍兽月形单胞菌K6对数生长期为816h。采用L9（34）正交实验法确定了粘膜乳杆菌lm4208及反刍兽月形单胞菌K6原生质体制备及再生的最佳条件。确定了粘膜乳杆菌lm4208原生质体的热灭活条件:56℃下灭活60min,反刍月形单胞菌K6的最低生长pH值为5.4。采用化学融合法即在融合剂PEG作用下将反刍兽月形单胞菌K6和灭活的粘膜乳杆菌lm4208原生质体进行了融合,在再生培养基上获得4株融合子,经传代最终获得一株遗传稳定的融合子F-K6-lm4208。对融合子F-K6-lm4208进行了形态学、生理生化性质及DNA分子量的鉴定,证明其是双亲产生的融合子,酸耐受试验表明融合子能在pH值5.1条件下存活。取健康奶牛瘤胃液,分别加入反刍兽月形单胞菌原始菌K6和耐酸工程菌F-K6-lm4208,并设立对照组,在体外模拟急性瘤胃酸中毒,于培养0、2、4、6、8、10、12、14、16、18h,检测培养液中pH、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量,研究其对瘤胃微生物发酵的影响。结果表明工程菌组培养液pH值在培养第4h之后达到最低点然后显著升高（p<0.01）,培养液中乳酸没有蓄积。添加原始菌和工程菌都能影响瘤胃微生物的发酵,影响乙酸和丙酸的生成比例,使发酵倾向于生成丙酸,但工程菌影响的程度要大于原始菌。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 微生物原生质体融合育种技术及其应用研究进展
• 1.1 微生物育种的方法
• 1.2 微生物原生质体融合育种及其应用研究进展
• 1.3 结语
• 第2章 围产期奶牛生产性疾病研究进展
• 2.1 围产期奶牛生理特点
• 2.2 生产性疾病
• 2.3 围产期奶牛生产性疾病之间的联系
• 第3章 亚急性瘤胃酸中毒研究进展
• 3.1 亚急性瘤胃酸中毒的定义
• 3.2 亚急性瘤胃酸中毒的危害
• 3.3 亚急性瘤胃酸中毒临床诊断参数
• 3.4 亚急性瘤胃酸中毒的预防措施
• 第二篇 研究内容
• 第1章 奶牛瘤胃耐酸乳酸杆菌的分离与鉴定
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果与分析
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第2章 反刍兽月形单胞菌和粘膜乳杆菌原生质体的制备与再生最佳条件的确定
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果与分析
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第3章 反刍兽月形单胞菌原生质体与灭活的粘膜乳杆菌原生质体的融合及融合子的筛选
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果与分析
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第4章 耐酸性反刍兽月形单胞菌融合子的鉴定
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果与分析
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第5章 耐酸反刍兽月形单胞菌在体外模拟急性酸中毒条件下对瘤胃微生物发酵的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果与分析
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
• 摘要
• 英文摘要
• 导师简介
• 作者简介