论文摘要
鼻腔免疫能直接切断病原微生物入侵动物体的传播途径,诱导机体产生局部和全身性的免疫应答,是一种非常有效的免疫方式。单独的灭活病毒鼻腔免疫不能产生理想的免疫效果,而免疫佐剂配合灭活病毒鼻腔免疫后能诱导机体产生高效的免疫应答,达到理想的免疫保护效果。本试验应用禽流感H9N2灭活病毒（inactivated avian influenza virus, IAIV）分别配合佐剂一和佐剂二鼻腔免疫雏鸡,通过检测血清中禽流感血凝抑制（hemagglutination inhibition, HI）抗体的水平以及攻毒保护试验来探讨这两种佐剂对IAIV鼻腔免疫的效果。同时,本文还分别研究了禽流感、鸡传染性法氏囊和鸡传染性支气管炎这三种病毒的活病毒和灭活病毒对鸡骨髓源树突状细胞（dendritic cells, DCs）成熟的影响,通过比较这三种不同病毒对鸡骨髓源DCs的免疫刺激活性来初步探讨IAIV的免疫机理。取得的结果如下：1两种佐剂配合禽流感H9N2灭活病毒鼻腔免疫的效果选取3日龄的雏鸡200只,随机分为5组,常规饲养。第1组应用IAIV配合佐剂一滴鼻免疫；第2组应用IAIV配合佐剂二滴鼻免疫；第3组应用IAIV滴鼻免疫；第4组应用IAIV油乳剂灭活苗肌肉注射；第5组应用PBS滴鼻免疫。免疫后每周采血（10只鸡／组）,用于检测血清中特异性禽流感HI抗体水平；分别在免疫后第1周、第2周、第3周,应用禽流感H9N2标准强毒攻击,用注射器从鼻腔滴注（10只鸡／组）。试验结果显示：与应用单独的灭活病毒相比,应用佐剂一组和应用佐剂二组不仅诱导机体产生了更高的禽流感HI水平,而且对鸡产生的攻毒保护率也更高。应用佐剂一组和应用佐剂二组在免疫早期诱导机体产生禽流感HI的水平高于应用油乳剂灭活苗肌肉注射组,同时在早期甚至整个攻毒试验中应用佐剂一组和应用佐剂二组都能对鸡产生完全保护效果。本试验结果表明佐剂一和佐剂二都能能够显著增强IAIV鼻腔免疫的免疫效果。2禽流感、传染性法氏囊、传染性支气管炎三种病毒对鸡骨髓源树突状细胞成熟的影响纯化禽流感（avian influenza virus, AIV）、鸡传染性法氏囊（infectious bursal disease virus, IBDV）、鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis virus, IBV）,纯化后的病毒经灭活后得到这三种病毒的灭活病毒。体外分离培养的鸡骨髓源DCs,分别经AIV、IBDV和IBV这三种病毒的活病毒和灭活病毒刺激培养24 h。首先应用流式细胞仪检测鸡骨髓源DCs表面成熟分子CD40和CD86的变化。接着应用WST-8 Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测分别经这三种病毒的活病毒和灭活病毒刺激后的鸡骨髓源DCs诱导同种异体T细胞增殖的能力。试验结果显示,分别经AIV、IBDV和IBV这三种病毒的活病毒和灭活病毒刺激后的鸡骨髓源DCs细胞表面成熟分子标志CD40和CD86表达量均上调。其中经三种灭活病毒分别刺激后的鸡骨髓源DCs表面成熟分子标志CD40和CD86表达量均分别高于三种活病毒刺激组,且IAIV刺激后,鸡骨髓源DCs表面成熟标志CD40和CD86表达量的上调幅度最大。同时分别经AIV、IBDV和IBV这三种病毒的活病毒和灭活病毒刺激后的鸡骨髓源DCs能显著诱导同种异体T细胞的增殖（P<0.01）,其中IAⅣ刺激后的鸡骨髓源DCs诱导同种异体T细胞增殖的能力最强。本试验结果提示IAⅣ能够有效的诱导鸡骨髓源DCs的成熟。