五灵脂化学成分与质量控制标准研究

论文摘要

五灵脂（Faeces Trogopterori）为复齿鼯鼠（Trogopterus xanthipes Milne-Edwards）的干燥粪便,性味甘温,无毒,入肝经,具有疏通血脉,散瘀止痛的功效。主治血滞、经闭、腹痛、胸胁刺痛、跌扑肿痛和蛇虫咬伤等症。临床上五灵脂广泛应用于妇科疾病、心脑血管疾病和消化系统疾病等。此外,五灵脂还用于药酒和香精的制造。近年,五灵脂的年需求量已达700-800吨。但是,由于五灵脂为动物粪便,相关研究工作远落后于其它中药,而且现代研究多集中在药理活性上,有关其化学成分和质量控制的研究少之又少。因此,本论文对五灵脂的化学成分和质量控制进行了较为深入的研究,研究结果将对五灵脂药材的深度开发利用提供科学依据。对五灵脂药材的化学成分进行了系统研究,采用溶剂法提取药材,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到三部分浸膏。采用GC-MS联用技术对五灵脂石油醚部分化学成分进行了分离鉴定,用面积归一化法确定了各成分的相对含量,共鉴定了21个化合物,其中主要成分为正四十一烷醇（21.72%）、香紫苏醇（14.08%）和棕榈酸（9.11%）,醇类化合物占总量的40%以上。.采用柱色谱分离纯化,四大光谱进行结构鉴定,从乙酸乙酯部分共分离鉴定了4个化合物,分别为二氢谷甾醇、β-谷甾醇、原儿茶酸和胡萝卜苷。原儿茶酸被证明为五灵脂药材中的活性成分之一,因此本研究以原儿茶酸为对照品,建立了五灵脂药材的HPLC含量测定方法。HPLC测定五灵脂中原儿茶酸含量的色谱条件：Agilent 1200, Hypersil GOLD C18色谱柱；流动相为甲醇-1%冰醋酸水（5：95）；流速为1 mL·min-1;检测波长260 nm。利用该方法,测定了12批市售五灵脂药材中原儿茶酸的含量,含量范围介于十万分之二至万分之六之间。五灵脂的乙酸乙酯部位在相关药理药效实验中,具有明显的活血化瘀的功效。因此对五灵脂乙酸乙酯部位的化学成分进行了HPLC分析,建立了指纹图谱分析方法：Agilent 1200, Hypersil GOLD C18色谱柱；流动相为A：甲醇,B：1%冰醋酸水。梯度洗脱程序：0-15 min（A：5%-30%）；15-40 min（A：30%-50%）；40-80 min（A：50%-75%）；80-90 min（A：75%-100%）；90-100min（A 100%）；流速为1 mL·min-1;检测波长260 nm。对14批不同来源的五灵脂药材的乙酸乙酯部位的指纹图谱进行了分析,共选出13个共有峰,其中12批药材的相似度大于0.9,只有两批样品的相似度较低,由此推测这两批样品的质量略差些,因此可以考虑通过指纹图谱的分析比较药材的优劣。通过气相色谱-质谱联用技术对五灵脂挥发油和侧柏叶挥发油的主要成分进行了对比鉴定,并用面积归一化法确定了各成分的相对含量。结果发现：两种挥发油中均含有下列9个化合物,分别是3-蒈烯、α-石竹烯、p-石竹烯、大香叶烯-D、α-蛇麻烯、反-雪松醇、雪松醇、α-杜松醇、Podocarp-7-en-3β-ol；但这9个化合物的相对百分含量有差别：3-蒈烯和雪松醇在侧柏叶中的相对百分含量分别为18.55%、20.82%,而在五灵脂中相对百分含量分别降至0.45%和0.02%,这些结果提示3-蒈烯和雪松醇在复齿鼯鼠体内得到了很好的吸收；而α-石竹烯、β-石竹烯、Podocarp.7-en-3β-ol在五灵脂中的含量较侧柏叶中的含量均有所升高,这说明这三种成分经复齿鼯鼠代谢后有所富集,这些结果为药用动植物相互关系的研究积累了资料。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 五灵脂药材的研究现状
• 1.1 五灵脂药材的考证与出处
• 1.1.1 五灵脂的考证
• 1.1.2 五灵脂的主要分布
• 1.2 五灵脂化学成分的研究
• 1.2.1 含氮类成分
• 1.2.2 三萜类成分
• 1.2.3 酚酸等成分
• 1.2.4 微量元素
• 1.2.5 挥发性成分
• 1.2.6 其他化学成分
• 1.3 五灵脂的质量控制标准现状
• 1.3.1 生药鉴别
• 1.3.2 显微鉴别
• 1.3.3 理化鉴别
• 1.4 五灵脂的药理学及临床应用研究
• 1.4.1 五灵脂的药理研究
• 1.4.2 五灵脂的临床应用研究
• 1.5 五灵脂与主要食料之间关系
• 1.5.1 柏子仁的研究
• 1.5.2 侧柏叶的研究
• 1.5.3 五灵脂与侧柏叶和柏子仁的化学成分比较
• 1.5.4 五灵脂与侧柏叶和柏子仁的药理比较
• 第2章 五灵脂中原儿茶酸的含量测定
• 2.1 仪器和实验材料的制备
• 2.1.1 仪器和药品
• 2.1.2 供试品的制备
• 2.2 色谱条件的确定
• 2.2.1 流动相的选择
• 2.2.2 色谱条件的确定
• 2.3 提取条件的确定
• 2.3.1 提取方式的选择
• 2.3.2 提取溶剂的选择
• 2.3.3 提取时间的选择
• 2.4 方法学的考察
• 2.4.1 线性关系考察
• 2.4.2 精密度试验
• 2.4.3 重现性试验
• 2.4.4 稳定性试验
• 2.4.5 回收率试验
• 2.5 不同产地的测定结果与讨论
• 2.5.1 不同产地五灵脂药材的测定结果
• 2.5.2 小结
• 第3章 五灵脂的指纹图谱研究
• 3.1 仪器和实验材料的制备
• 3.1.1 仪器与溶剂
• 3.1.2 生药来源
• 3.1.3 供试品的制备
• 3.2 方法与结果
• 3.2.1 五灵脂药材提取方法的确定
• 3.2.2 色谱条件的确立
• 3.3 方法学考察与结果
• 3.3.1 精密度考察
• 3.3.2 重复性考察
• 3.3.3 稳定性考察
• 3.3.4 五灵脂指纹图谱的建立
• 3.4 图谱数据分析与讨论
• 3.4.1 五灵脂标准药材的选择
• 3.4.2 五灵脂药材的相对保留值系统
• 3.5 指纹图谱的建立和讨论
• 3.5.1 五灵脂药材对照图谱的建立
• 3.5.2 五灵脂药材相似度计算
• 3.5.3 数据分析
• 3.5.4 结果与讨论
• 第4章 五灵脂的化学成分研究
• 4.1 五灵脂石油醚部分的化学成分研究
• 4.1.1 材料与仪器
• 4.1.2 方法的确立
• 4.1.3 结果与讨论
• 4.2 五灵脂乙酸乙酯部分的化学成分研究
• 4.2.1 材料与仪器
• 4.2.2 提取与分离
• 4.2.3 结构鉴定
• 第5章 五灵脂与侧柏叶的挥发油对比性研究
• 5.1 材料与仪器
• 5.2 方法的建立
• 5.2.1 挥发油的获取
• 5.2.2 GC-MS测定条件
• 5.2.3 化学成分分析
• 5.3 结果与讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果