生脉注射液对SD大鼠骨髓间充质干细胞表达多种造血相关因子的干预研究

论文摘要

目的：通过体外分离、培养SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）来鉴定其生物学特性，为进一步研究及实际临床应用提供实验基础；探讨生脉注射液对SD大鼠BMSCs增殖的影响，及生脉注射液对其分泌造血相关因子的影响，从而为生脉注射液在临床血液病中的应用提供有力的实验依据。方法：取SD大鼠股骨、胫骨骨髓，采用全骨髓贴壁分离筛选方法培养BMSCs，在显微镜下观察骨髓间充质干细胞的细胞形态学特点，并通过流式细胞仪技术鉴定BMSCs的生物学特性。用四氮哇蓝比色法（MTT比色法）检测生脉注射液对BMSCs增殖的影响，Real Time-PCR方法检测造血相关因子的表达及生脉注射液对造血相关因子表达的影响。结果：BMSCs在接种12～24小时后，大部分细胞能贴壁，随时间延长，可见细胞出现集落式生长，呈现成纤维细胞样，流式细胞仪鉴定BMSCs表面标志CD29阳性率为96.57%、CD44阳性率为93.63%，CD34阳性率为3.6%，CD45阳性率为12.3%。有粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、血小板生成素（TPO）、干细胞因子（SCF）表达；加入不同浓度的生脉注射液与BMSCs共同培养24h、48h、72h后，MTT比色法检测结果显示：以含5μL/ml浓度的生脉注射液组48h增殖作用最明显（P＜0.05），证明含5μL/ml浓度的生脉注射液的培养液最适宜BMSCs增殖；RealTime-PCR分析显示BMSCs可分泌GM-CSF、SCF、TPO，且GM-CSF、SCF的mRNA表达量显著高于对照组（P＜0.05），TPO的mRNA表达量与对照组相比明显下降，且以第九代下降最明显，差异有显著性（P＜0.05）。结论：1、通过全骨髓贴壁分离筛选培养法可成功地从SD大鼠骨髓中分离到骨髓间充质干细胞，并能检测出可表达多种造血相关因子。2、生脉注射液能促进BMSCs体外增殖，并可以促进BMSCs分泌GM-CSF、SCF，这可能揭示了骨髓间充质干细胞促进造血的部分作用机制。3、生脉注射液能抑制BMSCs分泌TPO，这可能揭示了生脉注射液具有活血化瘀、抗凝功效的作用机制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 理论研究
• 1.1 现代医学对骨髓间充质干细胞的认识
• 1.1.1 骨髓间充质干细胞的生物学特性
• 1.1.2 骨髓间充质干细胞的实验研究及临床应用
• 1.1.3 骨髓间充质干细胞与造血
• 1.2 祖国医学对骨髓间充质干细胞的认知
• 1.2.1 中医学“精气”学说与骨髓间充质干细胞的联系
• 1.2.2 中药对骨髓间充质干细胞的影响
• 1.3 中成药生脉注射液
• 第二部分 实验研究
• 2.1 SD 大鼠 BMSCs 的分离、培养与鉴定
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.3 结果
• 2.1.4 讨论
• 2.2 不同浓度的生脉注射液对骨髓间充质干细胞增殖的影响
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.2.3 结果
• 2.2.4 讨论
• 2.3 SD 大鼠 BMSCs 表达多种造血相关因子的基因检测
• 2.3.1 材料
• 2.3.2 方法
• 2.3.3 结果
• 2.3.4 讨论
• 2.4 结论
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 硕士期间发表的文章
• 个人简历及研究成果
• 致谢