新型多酸化合物（代号POM-2）抗乙肝病毒的实验研究

论文摘要

慢性乙型肝炎（Chronic Hepatitis B,CHB）是一种全球性广泛传播的传染病,它以持续性HBV复制所致的不同严重程度的肝脏炎性病变为特征,其中部分患者最终可能发展为肝硬化、肝细胞肝癌或肝功能衰竭。乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染对全球的公共健康是极大的挑战。因此研发治疗慢性乙型肝炎的有效药物具有重要意义。本课题利用无机合成方法合成了小分子含钒的化合物POM-2,并利用单晶X-射线衍射方法对其结构进行表征;采用细胞生物学、分子生物学及毒理学实验方法,分别检测了POM-2的体内和体外抗HBV的活性及毒性,并探讨POM-2的药物作用机制。在体外研究中以Hep G2.2.15细胞为模型,检测了POM-2对HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用、对mRNA和细胞内以及细胞外DNA合成的活性。体内药物活性研究中以1日龄北京鸭为实验模型,检测了POM-2对DHBV DNA合成的抑制作用和POM-2对减轻肝脏炎症的作用。按照新药毒理学评价方法,检测POM-2体内和体外毒性。研究结果显示新型多酸化合物POM-2细胞毒性较低,能够有效降低细胞培养上清液中HBeAg和HBsAg的含量,对细胞内和细胞外的DNA合成均有抑制作用,对HBV mRNA也有一定的抑制作用。体内实验结果显示,POM-2明显降低了鸭血清中的乙肝病毒载量,抑制了病毒的合成。病理实验结果表明POM-2减轻了肝脏炎症反应。体内毒理学实验结果显示POM-2属低毒化合物。本研究是在本课题组对多酸化合物抗病毒研究基础上,发现含5价钒离子多酸化合物具有抗HBV的活性,为新型非核苷类抗乙型肝炎药物开发和进一步的研究提供了实验依据。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 慢性乙型肝炎流行现况
• 2 HBV 的形态与结构
• 3 HBV 的基因结构及特征
• 4 乙肝病毒复制过程
• 5 乙型肝炎治疗现状
• 5.1 核苷类药物
• 5.2 生物类药物
• 5.3 免疫治疗
• 5.4 基因治疗
• 5.5 植物有效成分
• 5.6 联合用药
• 6 多酸类药物研究进展
• 6.1 多酸化合物概念
• 6.2 多酸化合物在药学上的研究概况
• 6.3 多酸药物的药理实验研究
• 第二章 POM-2 的合成与表征
• 1 实验材料
• 2 主要仪器
• 3 POM-2 的合成
• 4 POM-2 的结构表征
• 第三章 POM-2 体外抗HBV 的实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 细胞株
• 2.2 HepG2.2.15 细胞株的传代与培养
• 2.3 细胞毒性实验
• 2.4 POM-2 对HepG2.2.15 细胞分泌HbsAg 和HbeAg 的影响
• 2.5 POM-2 对细胞外HBV DNA 和细胞内HBV mRNA 的抑制作用
• 3 统计学方法
• 4 实验结果
• 4.1 HepG2.2.15 细胞培养及HBeAg 和HBsAg 分泌规律
• 4.2 细胞毒实验
• 4.3 受试化合物对HepG2.2.15 细胞分泌HBsAg 和HBeAg 的影响
• 4.4 POM-2 对HepG2.2.15 细胞外HBV DNA 及细胞内HBV mRNA的抑制作用
• 第四章 POM-2 体内抗HBV 的实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 试剂
• 1.2 病毒
• 1.3 实验动物
• 2 实验方法
• 2.1 鸭乙型肝炎病毒感染
• 2.2 药物治疗试验
• 2.3 检测方法
• 2.4 药效计算及统计学方法
• 3 统计分析方法
• 4 实验结果
• 4.1 1 日龄北京鸭感染DHBV 后，血清DHBV-DNA 含量变化
• 4.2 LAM 对DHBV 感染鸭血清DHBV-DNA 的影响
• 4.3 POM-2 对鸭血清DHBV-DNA 的影响
• 4.4 光镜检测结果
• 4.5 电镜检测结果
• 4.6 DHBV DNA 含量的斑点杂交结果
• 第五章 POM-2 毒性实验研究
• 1 POM-2 小鼠急性毒性实验
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学方法
• 2.4 实验结果
• 3 小鼠骨髓染色体实验
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 统计学方法
• 3.4 实验结果
• 4 POM-2 鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验（AMES 试验）
• 4.1 实验材料
• 4.2 主要仪器设备
• 4.3 实验方法
• 5 POM-2 大鼠90 天喂养实验
• 5.1 实验材料
• 5.2 主要仪器
• 5.3 实验方法
• 5.4 统计学方法
• 5.5 实验结果
• 第六章 讨论
• 1 POM-2 的结构与表征
• 2 细胞和动物模型的选择
• 2.1 细胞模型
• 2.2 动物模型
• 3 POM-2 体外抗乙肝病毒活性
• 3.1 细胞毒实验
• 3.2 受试化合物对HepG2.2.15 细胞分泌HBsAg 和HBeAg 的影响
• 3.3 POM-2 对2.2.15 细胞外HBV DNA 及细胞内HBV mRNA 的抑制作用
• 4 POM-2 体内抗乙肝病毒活性
• 4.1 动物模型血清DHBV-DNA 含量变化
• 4.2 LAM 对DHBV 感染鸭血清DHBV-DNA 的影响
• 4.3 POM-2 对鸭血清DHBV-DNA 的影响
• 5 POM-2 毒性评价
• 5.1 急性毒性实验
• 5.2 90 天喂养实验
• 5.3 Ames 试验
• 5.4 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验
• 5.5 小鼠骨髓淋巴细胞染色体畸变试验
• 参考文献
• 博士在读期间发表论文
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢