儿童特发性血小板减少性紫癜外周血中CD4、CD28、sFas和sFasL的表达及临床意义

论文摘要

特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是小儿时期最常见的出血性疾病之一。其主要的临床特点是：皮肤、黏膜自发性出血，血小板减少，骨髓巨核细胞数正常或增多。临床上分为急性型（≤6个月）和慢性型（>6个月）。儿童中以急性型多见，一般于发病后6个月内痊愈，但仍有20％左右患儿呈慢性型，其中一少部分对现有临床治疗方法疗效欠佳，最终成为难治性ITP（refractory ITP）。该病的发病机制尚未完全明了，目前已公认其是一种自身免疫性疾病。由于自身免疫功能异常，导致患儿产生抗血小板抗体，使血小板在单核-巨噬细胞系统被大量吞噬，从而引起血小板数量的减少，这种自身抗体的产生是Th细胞所依赖的。近年来研究发现ITP患儿外周血激活的淋巴细胞增多、细胞凋亡不足等与疾病的发生有关。CD4细胞是一重要的T淋巴细胞亚群包括Th细胞（辅助T淋巴细胞）和Ts（迟发超敏反应性T细胞）。CD4+Th细胞可分为Th1和Th2,其中Th1主要分泌IL-2、IFN-γ等，调节细胞免疫；Th2主要分泌IL-4、IL-10等，调节体液免疫。目前研究资料表明，Th1/Th2细胞的平衡在自身免疫病的发生发展过程中起重要作用，而在ITP中究竟是哪种偏移占优势尚没有定论，有待进一步研究。CD28是T细胞表面的一种跨膜糖蛋白，是T细胞活化的最重要协同刺激信号。静止的T细胞需要双信号途径才能有效激活并增殖，一个是T细胞受体（TCR）与抗原递呈细胞（APC）递呈的抗原相互作用，另一个是T细胞辅助分子与抗原递呈细胞上的配体相互作用产生的共刺激信号。如果只有TCR与APC的抗原相互作用而缺乏共刺激信号则可导致T细胞发生激活诱导的细胞死亡（AICD）。CD28/B7分子启动的胞内信号能保护T细胞避免AICD，还可引起T细胞抗凋亡基因bcl-XL表达增高，调亡基因Fas表达下调，从而保护T细胞免于凋亡。细胞凋亡是一组由基因控制的细胞自主性死亡过程，近年研究表明Fas/FasL在细胞凋亡中起关键作用。Fas是Ⅰ型膜蛋白，属于肿瘤坏死因子（TNF）受体家族，Fas配体（FasL）是Ⅱ型膜蛋白，属于TNF家族。sFas（Fas的可溶性形式）是由蛋白水解酶水解膜结合Fas或由Fas变异体mRNA翻译而形成；sFasL（FasL的可溶性形式）由金属蛋白酶裂解膜结合FasL而形成。sFas可与膜型Fas竞争与FasL结合，从而调节细胞凋亡。研究发现多种自身免疫性疾病患者存在外周血淋巴细胞凋亡异常。本实验的目的旨在通过检测CD4、CD28及sFas、sFasL在儿童急慢性ITP中的表达来研究其在儿童ITP发病机制中的作用，进一步探索CITP与AITP在免疫机制方面有何区别，同时为ITP，尤其是CITP实施高效选择性免疫调节治疗提供理论依据。材料与方法1．实验材料：选取2006年1月至8月郑州大学第一附属医院门诊及住院的ITP患儿45例，其中25例AITP和20例CITP9年龄为6月～13岁，平均5.3岁。诊断均符合全国小儿血液学会议制定的标准。对照组为排除血液系统疾病及免疫性疾病的20例儿童，年龄为3岁～8岁，平均6.2岁。2．实验方法：用流式细胞术分别检测25例AITP和20例CITP患儿及20例正常对照儿童外周血淋巴细胞CD4+、CD28+、CD4+CD28+的表达，每个样本获取6000个细胞，用流式细胞仪CELLQUGST软件分析；用酶联免疫夹心法（ELISA）测定AITP和CITP患儿及正常儿童外周血中sFas和sFasL的水平。所有数据用均数±标准差（（?）±s，％）表示，采用SPSS13.0软件包进行统计学分析。计量资料均以a=0.05为检验标准，P<0.05为差异具有显著性。结果1外周血中CD4+、CD28+、CD4+CD28+的表达率在AITP组中分别为27.64±5.99，35.19±10.52，24.82±5.89；CITP组中为24.48±4.35，31.94±7.09，22.55±4.00；正常儿童中为36.83±3.96，52.58±9.38，33.87±3.94。其中AITP和CITP中CD4+、CD28+、CD4+CD28+的表达均小于正常对照组，差异有显著性（P<0.05）；AITP和CITP组间没有显著差异（P>0.05）。2外周血中sFas和sFasL的水平在AITP组中分别为15.69±1.62，0.73±0.10；CITP组中为11.77±2.14，0.49±0.12；对照组中为5.77±1.13，0.31±0.02。其中AITP和CITP组均高于正常对照组，差异有显著性意义（P<0.05），且AITP组与CITP组之间有显著差异（P<0.05）。3相关性分析ITP患儿外周血中sFas和sFasL间呈正相关（r=0.660，P<0.05）；CD28和sFas间没有明显相关（P>0.05）。结论1．儿童ITP的发病过程中存在细胞免疫异常。2．CD28共刺激信号传导通路异常参与儿童ITP的发病。3．sFas和sFasL凋亡参与儿童ITP的发病过程，且可能在AITP患儿中作用更明显。4．检测sFas和sFasL在ITP患儿外周血中的水平，对ITP患儿的分型和预后有重大意义，并有助于我们对CITP，尤其是难治型ITP患儿实施高效选择性免疫调节治疗提供理论依据。

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• 4、CD₂₈、sFas和sFasL的表达及临床意义'>学位论文 儿童特发性血小板减少性紫癜外周血中CD₄、CD₂₈、sFas和sFasL的表达及临床意义
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述 儿童特发性血小板减少性紫癜的研究进展
• 正文
• 参考文献
• 缩写词索引
• 致谢