Hsp70-肽复合物致敏的树突状细胞抗肿瘤效果的实验研究

论文摘要

目的:探讨从胃癌组织中分离Hsp70-肽复合物,并致敏树突状细胞（DC）,观察其在体外的抗肿瘤作用,为DC 介导的肿瘤免疫治疗提供理论实验依据。方法:采用GM-CSF、IL-4 刺激,培养胃癌患者外周血单个核细胞（PBMC）,增殖产生大量DC,用SephadexG-100 凝胶层析法从临床胃癌组织中提取Hsp70-肽复合物,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量并行western-bolt鉴定。用此复合物修饰DC,通过ELISA 法对修饰DC 和未被Hsp70-肽复合物修饰DC 上清液的IL-12、TNF-α、IL-1β含量进行检测,用DC 激活自体混合T 淋巴细胞,观察其在体外对胃癌细胞的杀伤作用,用未被Hsp70-肽复合物修饰DC 作对照。结果:用SephadexG-100 凝胶层析法从临床胃癌组织中提取的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和western-bolt 鉴定为Hsp70,从胃癌患者外周血获得的PBMC 经GM-CSF、IL-4 刺激培养7d 后电镜观察细胞不规则形,细胞表面粗糙突起明显,细胞核呈肾形和马蹄形,可确定为DC。Hsp70 修饰DC 后分泌IL-12、TNF-α、IL-1β等细胞因子的含量为（305.02±20.70）pg/ml 、（480.61±32.52）pg/ml、（519.60±39.12）pg/ml,而未被Hsp70 修饰DC 分泌的细胞因子IL-12 、TNF-α、IL-1β的含量为（3.81±0.84）pg/ml、（3.50±0.21）pg/ml、（50.11±2.86）pg/ml.两者比较具有明显的差异（P﹤0.01）。Hsp70 修饰DC 激活的T 淋巴细胞后对胃癌细胞的杀伤力为（93.5±8.2）%,与对照组的杀伤力（6.2±0.3%）比较具有显著差异（P﹤0.01）。结论:从胃癌组织中提取蛋白为Hsp70,该蛋白保留了Hsp70 蛋白的原有生物活性,具有肿瘤的抗原信息。Hsp70 修饰DC 后,产生IL-12 、TNF-α、IL-1β等细胞因子的水平明显增加,修饰的DC 激活T 淋巴细胞后对肿瘤细胞具有很强的杀伤作用。

论文目录

• 一、 中文摘要
• 二、 英文摘要
• 三、 前言
• 四、 材料与方法
• 五、 结果
• 六、 讨论
• 七、 结论
• 八、 参考文献
• 九、 附图
• 十、 致谢