构建可选择性杀灭转基因水稻并利用该体系表达人血清白蛋白

论文摘要

植物生物技术广泛应用于作物性状改良和生产高价值的蛋白。但是花粉传播和种子的意外传播是人们对商业化种植的转基因作物对环境和食品安全的主要担忧。本研究利用从Pesudomonas putida上克隆获得的草甘膦抗性基因（EPSPS）与水稻苯达松解毒酶CYP81A6基因的RNA干扰读码框连锁。利用农杆菌侵染法转化水稻,获得具有草甘膦抗性同时对苯达松敏感的转基因水稻。温室和田间试验显示,喷施苯达松正常田间使用剂量就可以完全杀死转基因水稻。T1代转基因水稻农艺性状的田间调查表明,抑制水稻中CYP81A6的表达对转基因水稻的生长、发育和产量没有显著影响。人血清白蛋白是临床上广泛应用的医用蛋白。医用人血清白蛋白主要是从人的血浆中分级纯获得。本研究构建了植物转化双元载体1300-R450-200i-HSA。其T-DNA由三部分组成：种子特异性启动子Gt1介导的人血清白蛋白基因；草甘膦抗性基因EPSPS和抑制CYP81A6表达的RNAi读码框。利用农杆菌侵染法转化水稻,对转化得到的植株进行分子鉴定,结果显示T-DNA已整合进水稻基因组中。对表达重组血清白蛋白的T。代水稻种子分析显示,转基因水稻种子具有血清白蛋白高表达量。对T,代转基因水稻除草剂敏感性检测显示,转基因水稻对苯达松敏感同时对草甘膦具有抗性。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 文献综述
• 1 转基因漂移及其生态效应
• 1.1 基因漂移的概念
• 1.2 基因漂移是生物进化的一部分
• 1.3 基因漂移导致转基因逃逸
• 2 控制转基因植物基因逃逸的分子策略
• 2.1 母系遗传法
• 2.2 雄性不育
• 2.3 Terminator技术
• 2.4 花粉漂移控制策略
• 2.5 基因删除技术
• 2.6 闭花授粉和孤雌生殖法
• 2.7 基因组不相容性
• 2.8 TM基因的应用
• 3 植物抗除草剂能力及应用
• 3.1 除草剂在植物体内的代谢
• 3.2 除草剂代谢作用与选择性
• 3.3 P450基因的研究及应用
• 4 本研究目的意义
• 第二章 可选择性消灭转基因水稻的研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 植物材料
• 1.2 菌株及载体
• 1.3 主要培养基配方
• 1.4 酶及生化试剂
• 1.5 转化载体构建
• 1.6 T-DNA载体pCAMB1300Rice-G6-450i构建
• 1.7 质粒DNA转化根癌农杆菌
• 1.8 根癌农杆曹介导的水稻遗传转化和转基因水稻植株再生
• 1.9 转化植株的筛选和再生
• 1.10 转基因水稻除草剂敏感性检测
• 1.11 转基因水稻的PCR鉴定
• 1.12 Western blot分析
• 1.13 RNAi对转基因水稻苯达松解毒酶表达的抑制作用分析
• 1.14 农艺性状统计
• 2 结果与分析
• 2.1 水稻转化质粒p1300-G6-450i的构建
• 2.2 转基因水稻的获得
• 0代转基因水稻的除草剂敏感性检测'>2.3 T₀代转基因水稻的除草剂敏感性检测
• 2.4 苯达松解毒酶CYP81A6的表达差异
• 2.5 田间农艺性状
• 3 小结与讨论
• 第三章 利用可选择性灭杀水稻为生物反应器表达人血清白蛋白
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 植物材料
• 1.2 菌株及载体
• 1.3 主要培养基配方
• 1.4 酶及生化试剂
• 1.5 转化载体构建
• 1.6 重组人血清白蛋白基因的克隆
• 1.7 植物表达载体的构建
• 1.8 农杆菌介导的水稻遗传转化和转基因水稻植株再生
• 1.9 转重组人血清白蛋白基因水稻的PCR鉴定
• 1.10 转重组人血清白蛋白基因水稻苯达松敏感性检测
• 1.11 RNAi对转基因水稻苯达松解毒酶表达的抑制作用分析
• 1.12 人血清白蛋白表达量的分析
• 2 结果与讨论
• 2.1 水稻转化质粒1300-R450-200i-HSA的构建
• 2.2 根癌农杆菌介导的水稻遗传转化和转基因水稻植株再生
• 2.3 除草剂敏感性检测
• 2.4 RNAi对苯达松解毒酶CYP81A6表达的抑制作用
• 2.5 人血清白蛋白表达量的分析
• 3 小结与讨论
• 总讨论
• 参考文献
• 附录 实验用溶液及培养基配方