核转录因子激活蛋白2α对肺腺癌A549细胞血管内皮生长因子基因/蛋白质表达的影响及意义

论文摘要

目的：观察激活蛋白-2α（activator protein-2 alpha，AP-2α）对肺腺癌A549细胞株血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial cell growth factor, VEGF）基因和蛋白表达的影响，以及顺铂干预下AP-2α调节A549细胞VEGF表达的变化，探讨AP-2α在肺癌发生发展中的作用和机制。方法：1、运用转基因技术，以不同浓度的Ad-LacZ（10，30，50 MOI）转染A549细胞，用X-gal染色鉴定转染效率；2、用50 MOI，100MOI的Ad-AP-2α转染A549细胞24小时，采用免疫组化法及差异表达RT-PCR法检测不同转染浓度的A549细胞VEGF蛋白质／基因的表达水平；3、用10mg／1DDP分别联合50 MOI，100 MOI的Ad-AP-2α转染A549细胞24小时，采用免疫组化法及差异表达RT-PCR法检测DDP干预下不同转染浓度的A549细胞VEGF蛋白质／基因的表达水平；结果：1、用10MOI，30MOI，50MOI的Ad-LacZ分别转染A549细胞24小时后，其转染率分别为42.1％，76.8％，91.3％。选用50MOIAd-LacZ的腺病毒介导的基因能进入90％的细胞内，符合实验要求。2、A549细胞在转染不同浓度的Ad-AP-2α24小时后，VEGF蛋白质及mRNA的表达水平较转染前显著增高，且随转染倍数增加而增强，呈剂量依赖性（P＜0.05）；3、在顺铂干预情况下，A549细胞在转染不同浓度的Ad-AP-2α24小时后，VEGF蛋白质及mRNA的表达水平较转染前增加，并随转染倍数增加而增强（P＜0.05）；结论：1、AP-2α对肺腺癌A549细胞VEGF蛋白质／基因表达有促进作用，提示AP-2α在肺癌的发生发展中可能起促肿瘤生长样作用。2、顺铂干预下AP-2α仍能上调A549细胞VEGF表达，提示AP-2α可能影响肺癌对化疗药物顺铂的敏感性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 缩略语表
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 细胞系
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要试剂的配制
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.1.5 引物合成
• 2.2 方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 实验分组
• 2.2.3 细胞内基因转染
• 2.2.3.1 待转染细胞的准备
• 2.2.3.2 腺病毒介导Lac Z基因转染率测定
• 2.2.3.3 腺病毒介导的LacZ基因转染
• 2.2.3.4 腺病毒介导的AP-2α基因转染
• 2.2.4 免疫组化学法检测VEGF蛋白表达
• 2.2.5 逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）
• 2.2.5.1 细胞RNA提取
• 2.2.5.2 逆转录反应
• 2.2.5.3 PCR反应
• 2.2.5.4 RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.5.5 半定量分析
• 2.3 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 腺病毒转染率测定
• 3.2 AP-2A基因对细胞内VEGF蛋白表达的影响
• 3.3 AP-2A基因对细胞VEGFMRNA表达的影响
• 3.4 DDP干预后AP-2A基因对细胞内VEGF蛋白表达的影响
• 3.5 DDP干预后AP-2A基因对细胞内VEGFMRNA表达的影响
• 3.6 实验结果图
• 第四章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢