论文摘要
研究背景遗传代谢病是一类严重危害人类身心健康的难治疾患,不仅为家庭及社会带来沉重负担,而且危及子孙后代,直接影响人口素质的提高。由于多数遗传病的治疗仍颇为艰难或费用昂贵,难以普遍实施。因此为减少遗传病的发生,广泛开展预防工作就显得格外重要。目的研究两个中国人A型尼曼-匹克病（Niemann-Pick Disease,NPD）家系发病的分子基础及基因检测在中国人NPD家系基因诊断中的意义,并探讨其基因型与临床表型的关系。方法收集两位先证者及其家庭成员的临床资料,采用基因组小剂量抽提试剂盒从2个家系共6名成员的外周血中提取基因组DNA,根据人类基因组数据库中获得的SMPD1 （SPHINGOMYELIN PHOSPHODIESTERASE 1）基因序列（NM000543）设计4对引物,采用聚合酶链反应（PCR, Polymerase Chain Reaction）进行扩增,并采用PCR产物回收试剂盒进行产物回收后DNA直接测序法进行基因突变检测,测序结果应用DNAman软件进行序列对比分析,确定基因突变位点,对测序异常的片段重新进行PCR扩增与测序,以验证结果的可靠性。结果1.PCR扩增所得片段与预计扩增片段大小一致,没有非特异扩增带,可以进行纯化与测序。2.家系1中先证者外显子1正反向测序在107碱基处显示C单峰,显示cDNA107T→C的纯合突变。其父亲、母亲及姐姐外显子1正反向测序在107碱基处显示T/C杂合双峰,显示cDNA 107T→C的杂合突变。107T→C的突变将导致SMPD1编码的转录因子第36位氨基酸的密码子GTG被GCG取代,从而使其编码的缬氨酸变成丙氨酸（V36A）,属于错义突变。3.家系2中先证者外显子1正反向测序在107碱基处显示C单峰,显示cDNA107T→C的纯合突变。其母外显子1正反向测序在107碱基处显示T/C杂合双峰,显示cDNA 107T→C的杂合突变。107T→C的突变将导致SMPD1编码的转录因子第36位氨基酸的密码子GTG被GCG取代,从而使其编码的缬氨酸变成丙氨酸（V36A）,属于错义突变。结论1.证实SMPD1基因是本研究中两个无关的A型尼曼匹克病家系的致病基因,与国外报道一致。2.两个家系患儿均为SMPD1基因纯合突变致病,家庭其他成员为表型正常的基因突变携带者。3.证实cDNA 107T→C突变是引起本研究中两个家系患儿发病的分子基础,有利于该病产前诊断、基因诊断及遗传咨询的开展。
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标签：尼曼匹克病论文; 遗传学论文; 酸性神经鞘磷脂酶论文; 突变论文;