脱氢表雄酮对支气管上皮细胞上皮间质转化的作用及机制

论文摘要

目的：采用转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）诱导人支气管上皮细胞株16HBE-14。构建上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT）模型,观察脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone,DHEA）对TGF-β1诱导的EMT的作用,并探讨其具体机制。方法：1.将16HBE-14。用含有5%胎牛血清的MEM培养基培养,5ng/ml TGF-β1作用16HBE-14o72h,观察细胞的形态变化,采用Western Blot（WB）检测E一钙粘素（E.cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达。2.给予不同浓度（1μM、10μM、100μM）DHEA预处理细胞24h,后加入TGF-β1干预72h,检测方法同1。3.设DHEA100（DHEA终浓度为100μM）+TGF-β1组和TGF-β1组,在不同时间点（0、0.5h、1h、2h）采用WB检测两组细胞p-AKT及AKT的变化过程。4.分别予雄激素受体（androgen receptor,AR）拮抗剂氟他胺、PI3K抑制剂LY294002（LY）或PI3K激动剂IGF-1预处理细胞,设八组,分别为（1）无处理组；（2）TGF-β1组；（3）DHEA100+TGF-β1组；（4）DHEA100+TGF-β1+氟他胺组；（5）TGF-β1+LY组；（6）TGF-β1+IGF-1组；（7）TGF-β1+DHEA100+LY组；（8）TGF-β1+DHEA100+IGF-1组,TGF-β1共同干预1h后立即收集细胞,WB检测各组细胞p-AKT及AKT的变化。各组细胞加入TGF-β1培养72h后立即收集细胞,WB检测各组细胞E-cadherin.α-SMA表达。结果：1. TGF-β1作用72h后,细胞鹅卵石外观变为梭形,细胞间连接疏松。E-cadherin表达下降；α-SMA表达增强。2.不同浓度DHEA对TGF-β1诱导EMT均有抑制作用,且呈浓度依赖性,100μMDHEA抑制作用最强。3. TGF-β1组、DHEA100+TGF-β1组均在TGF-β1处理后,p-AKT蛋白表达增加,1h达到高峰。DHEA抑制p-AKT蛋白表达,AKT蛋白表达无明显差异（P>0.05）。4.氟他胺可减轻DHEA对p-AKT蛋白表达及EMT过程的抑制作用。5.LY可进一步降低p-AKT蛋白表达及EMT过程；IGF-1促进p-AKT蛋白表达及EMT发生。结论：1. TGF-β1能诱导16HBE-14o发生EMT。2. DHEA对TGF-β1诱导的EMT有抑制作用,且呈浓度依赖性。3. DHEA通过AR而发挥对TGF-β1诱导的EMT的抑制作用。4. DHEA对EMT的抑制作用与PI3K/AKT信号途径有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 縮略词表
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验对象
• 1.2 仪器设备与试剂
• 1.2.1 仪器设备
• 1.2.2 主要试剂与耗材
• 1.3 试剂的配制
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 16HBE-14o细胞的培养
• 1.4.2 实验分组及给药方案
• 1.4.3 Western Blot检测
• 1.5 统计分析
• 第二章 结果
• 2.1 TGF-β1诱导EMT模型的建立
• 2.2 不同浓度DHEA对TGF-β1诱导EMT的抑制作用
• 2.3 TGF-β1处理后不同时间点p-AKT及AKT蛋白表达变化
• 2.4 各组细胞p-AKT及AKT蛋白表达变化
• 2.5 各组细胞E-cadherin及α-SMA蛋白表达变化
• 2.5.1 各组细胞E-cadherin蛋白表达变化
• 2.5.2 各组细胞α-SMA蛋白表达变化
• 第三章 讨论
• 3.1 EMT与哮喘气道重塑的关系
• 3.2 TGF-β1诱导EMT模型的建立
• 3.3 DHEA通过AR发挥对EMT的作用
• 3.4 DHEA对EMT的抑制作用可能与PI3K/AKT途径有关
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果