生物碱的分离分析及其液相色谱保留机理的研究

论文摘要

生物碱类天然产物在全世界备受重视,这不仅因为其具有生物来源多样性和化学结构多样性,更重要的是其具有生物活性多样性的特点。对来源于不同植物,存在于复杂体系或基质中的生物碱进行快速、灵敏、可靠的定性定量分析一直是受人瞩目的研究课题。为此,本文采用液质联用、气质联用、“绿色”色谱及制备色谱等技术对不同结构类型的生物碱进行了分离分析方法学的研究。具体内容包括:1.采用柱层析和制备型高效液相色谱分离纯化了荷叶碱、N-降荷叶碱、O-降荷叶碱和绕炔碱（莲碱）等阿朴啡类生物碱,并且通过紫外、红外、质谱和核磁进行结构确证。以荷叶碱、N-降荷叶碱、O-降荷叶碱和绕炔碱为对象,首次成功地建立了阿朴啡类生物碱的液质联用和气质联用分析方法。并且把这两种方法应用于荷叶、荷叶类减肥食品和降脂胶囊的质量控制中,获得满意的结果。2.首次利用大孔吸附树脂分离纯化了血根碱和白屈菜红碱等α-萘非啶类生物碱,并且通过紫外、红外、质谱和核磁进行结构确证。以血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱为对象,建立了α-萘非啶类和前托品类生物碱液质联用的检测方法,并且把此方法应用于博落回中两类不同结构类型生物碱同时分析检测和有毒蜂蜜中有毒成分的鉴定,获得满意的结果。3.采用液质联用方法,以原小檗型、吲哚喹啉型和喹诺酮型三种不同结构类型生物碱为对象,建立了多种不同结构类型生物碱的分析方法,并且成功把方法应用于中药复方左金丸、反左金丸、甘露散丸和茱萸丸方的分析检测中,为中药复方的质量控制提供了有效的检测方法。4.针对季铵型生物碱脱尾严重,现有的流动相系统不适合于液质联用分析,考察了挥发性物质作为离子对试剂的反相离子对色谱中各种实验参数对保留值的影响,并根据实验结果对已有离子对色谱保留模型进行了研究。实验证明采用挥发性离子对试剂的反相色谱法中,其色谱保留机理与统计热力学模型最为相符。并根据实验结果,提出了新的柱温对色谱中容量因子的影响模型公式。通过实验优化后对选择的十种生物碱取得令人满意的分离效果,并且适合于液质联用分析,因此以挥发性物质作为离子对试剂的反相离子对色谱,可以作为其他生物碱分离分析的参考和借鉴。5.发展了“绿色”色谱分析有机胺类生物碱的方法,利用室温离子液体的水溶液作为绿色流动相,以章鱼胺,辛弗林和酪胺等有机胺类生物碱为对象,成功解决了分离章鱼胺,辛弗林和酪胺的峰形拖尾,低保留和低分离度的问题,并且成功应用于枳实和枳壳药材的质量控制。6.针对大分子难电离的含氮化合物在电喷雾质谱难电离并且检测灵敏度低这一难点,以维生素B12为对象,采用高锥孔电压技术,把分散准分子离子峰集中到某一特征

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 生物碱的分类
• 1.1.1 杂环衍生物类
• 1.1.2 萜衍生物类
• 1.1.3 甾衍生物类
• 1.1.4 环肽类生物碱
• 1.1.5 有机胺类生物碱
• 1.2 生物碱的药理作用
• 1.3 生物碱的分析方法
• 1.4 HPLC 分析生物碱的保留机理
• 1.5 本研究课题的提出
• 第2章 阿朴啡类生物碱的分离分析方法研究
• 第1节 阿朴啡类生物碱单体的分离纯化及其结构鉴定
• 2.1.1 引言
• 2.1.2 仪器与试剂
• 2.1.3 提取与分离
• 2.1.4 结构鉴定
• 2.1.5 制备高效液相色谱分离纯化荷叶碱
• 2.1.6 小结
• 第2节 阿朴啡类生物碱HPLC-DAD-ESI/MS 分析方法研究
• 2.2.1 引言
• 2.2.2 实验部分
• 2.2.2.1 实验仪器
• 2.2.2.2 化学试剂
• 2.2.2.3 样品预处理
• 2.2.2.4 绕炔碱标准品的制备
• 2.2.2.5 标准溶液的配制
• 2.2.3 结果与讨论
• 2.2.3.1 流动相添加剂的选择
• 2.2.3.2 流动相添加剂浓度的优化
• 2.2.3.3 梯度洗脱条件的优化
• 2.2.3.4 检测波长的选择
• 2.2.3.5 质谱条件的优化
• 2.2.3.6 N-降荷叶碱、O-降荷叶碱、荷叶碱和绕炔碱的LC-MS 鉴定
• 2.2.3.7 方法确证
• 2.2.3.8 荷叶和荷叶提取物中四种生物碱的HPLC-UV 测定
• 2.2.3.9 不同生长时期荷叶中阿朴啡类生物碱的含量测定
• 2.2.3.10 复方中荷叶碱的分析
• 2.2.4 小结
• 第3节 阿朴啡类生物碱GC-MS 分析方法研究
• 2.3.1 引言
• 2.3.2 实验部分
• 2.3.2.1 实验仪器及其条件
• 2.3.2.2 化学试剂
• 2.3.2.3 样品预处理
• 2.3.2.4 标准溶液的配制
• 2.3.3 结果与讨论
• 2.3.3.1 进样方式的选择
• 2.3.3.2 载气流速的选择
• 2.3.3.3 柱温的优化
• 2.3.3.4 定量离子的选择
• 2.3.3.5 GC-MS 对荷叶中生物碱的定性分析
• 2.3.3.6 方法确证
• 2.3.3.7 荷叶和荷叶提取物中阿朴啡类生物碱的GC-MS 的测定
• 2.3.3.8 GC-MS 与HPLC-ESI/MS 在分析阿朴啡类生物碱的比较
• 2.3.4 结论
• 第3章 α-萘非啶类和前托品类生物碱的分离分析方法研究
• 第1节 血根碱和白屈菜红碱的分离制备及其结构鉴定
• 3.1.1 引言
• 3.1.2 实验部分
• 3.1.2.1 实验仪器和试剂
• 3.1.2.2 大孔吸附树脂分离纯化血根碱和白屈菜红碱
• 3.1.3 结构鉴定
• 3.1.3.1 化合物1 的结构鉴定
• 3.1.3.2 化合物2 的结构鉴定
• 3.1.4 小结
• 第2 节α-萘非啶类和前托品类生物碱的HPLC-ESI/MS 快速分析方法的建立
• 3.2.1 引言
• 3.2.2 实验部分
• 3.2.2.1 试剂和药材
• 3.2.2.2 微波萃取
• 3.2.2.3 标准溶液的配制
• 3.2.2.4 HPLC-ESI/MS 分析
• 3.2.3 结果与讨论
• 3.2.3.1 微波萃取条件的优化
• 3.2.3.2 色谱分离条件和ESI/MS 条件的优化
• 3.2.3.3 定量、回收率和检测限
• 3.2.3.4.H PLC-ESI/MS 分析博落回果实中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱
• 3.2.4 结论
• 第3节 被外源污染蜂蜜中痕量的血根碱和白屈菜红碱HPLC-ESI/MS 分析方法的建立
• 3.3.1 引言
• 3.3.2 实验部分
• 3.3.2.1 试剂
• 3.3.2.2 样品预处理
• 3.3.2.3 标准溶液
• 3.3.2.4 LC-MS 分析
• 3.3.3 结果与讨论
• 3.3.3.1 色谱柱和流动相的选择
• 3.3.3.2 锥孔电压的影响
• 3.3.3.3 方法确证
• 3.3.3.4 蜂蜜样品的分析
• 3.3.4 结论
• 第4章 多种结构类型的生物碱同时分离分析方法研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 仪器
• 4.2.2 试剂
• 4.2.3 中药复方和黄连-吴茱萸草药对的预处理
• 4.2.4 标准溶液
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 色谱条件的选择
• 4.3.2 锥孔电压的优化
• 4.3.3 黄连-吴茱萸草药对和中药复方中生物碱的鉴定
• 4.3.4 方法确证
• 4.3.5 黄连-吴茱萸草药对和中药复方中生物碱的定量分析
• 4.4 结论
• 第5章 挥发性离子对试剂应用于叔胺和季铵型生物碱的反相色谱保留行为的研究和相关保留机理的探讨
• 5.1 引言
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 实验仪器
• 5.2.2 实验试剂
• 5.2.3 溶液的配制
• 5.2.4 色谱条件
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 不同类型离子对试剂对十种生物碱保留值的影响
• 5.3.2 离子对试剂浓度对保留值的影响
• 5.3.3 流动相中有机相的浓度对保留值的影响
• 5.3.4 温度对保留值的影响
• 5.3.5 综合反相离子对色谱各因素对保留值的影响
• 5.4 结论
• 第6章 有机胺类生物碱的“绿色色谱”方法学研究
• 6.1 引言
• 6.2 实验部分
• 6.2.1 试剂和标准品
• 6.2.2 HPLC 分析
• 6.2.3 样品预处理
• 6.2.4 柱效能、分离度、拖尾因子和容量因子的测量
• 6.3 结果与讨论
• 6.3.1 RTIL 的选择
• 6.3.2 RTIL 浓度的影响
• 6.3.3 pH 的影响
• 6.3.4 温度的影响
• 6.3.5 方法确证
• 6.3.6 离子液体作为流动相分析枳实、枳壳、陈皮和青皮中肾上腺胺
• 6.4 结论
• 第7章 大分子难电离含氮的化合物ESI/MS 离子化效率改善研究-高锥孔电压技术
• 7.1 引言
• 7.2 实验部分
• 7.2.1 试剂
• 7.2.2 样品
• 7.2.3 标准溶液的制备
• 7.2.4 游离的维生素812 的提取
• 7.2.5 总的维生素812 的萃取
• 7.2.6 HPLC-ESI/MS
• 7.3 结果与讨论
• 7.3.1 分离条件的优化
• 7.3.2 锥孔电压和定量离子的优化
• 7.3.3 方法确证
• 7.3.4 样品分析
• 7.4 结论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A（攻读博士学位期间所发表的学术论文目录）
• 附录B（攻读博士学位期间所授权的专利）