论文摘要
意大利黑麦草（Lolium multiflorum Lam.）和象草（PennisetumpurpureumSch.）,分别为典型的冷季型和暖季型牧草,广泛的分布于温带、亚热带和热带地区。在中国,它们是重要的饲料作物,以鲜草、干草或者青贮饲料的形式用于反刍动物生产。本论文系统地调查了意大利黑麦草和象草化学成分以及微生物数量和种类的日间变化,及其对牧草青贮饲料发酵品质的影响,以期明确影响青贮饲料发酵品质的主要因素,为牧草青贮饲料的生产实践提供理论依据。1不同刈割时间对意大利黑麦草发酵品质的影响本试验旨在研究意大利黑麦草化学成分和微生物数量的日间变化,及其对青贮饲料发酵品质和体外消化量的影响。意大利黑麦草（第一茬,抽穗期）分别于2011年4月27日（第1次试验）,5月5日（第2次试验）和2012年5月5日（第3次试验）,在早上（08:00 h,AM）,中午（13:00 h,M）和傍晚（18:00 h,PM）刈割,取样分析并调制青贮饲料,分别于青贮后30天（第1次试验）,1、3、5、7、14和30天（第2次试验）和1、3、5、7和30天（第3次试验）开窖,取样分析并测定体外消化量。使用变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析刈割第2天意大利黑麦草青贮前后细菌多样性。结果表明:从早上到傍晚,意大利黑麦草水溶性碳水化合物（WSC）含量逐渐增加,中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）含量逐渐减少。AM时意大利黑麦草附着微生物数量,包括有氧细菌、乳酸菌、霉菌和酵母,均显著高于（P<0.05）M和PM时的牧草。青贮发酵30天后,PM时刈割的意大利黑麦草调制的青贮饲料与AM和M时刈割的牧草青贮饲料相比具有较好的发酵品质,其干物质（DM）、WSC含量和乳酸/乙酸比率（LA/AA）较高（P<0.05）,而青贮饲料pH、氨态氮（NH3-N）、丁酸和总挥发酸（VFAs）含量较低（P<0.05）。PM时刈割的意大利黑麦草青贮饲料体外干物质消化量（DM-D）和中性洗涤纤维消化量（NDF-D）较高（P<0.05）。M时刈割的意大利黑麦草未能在青贮过程中建立稳定的乳酸菌发酵体系,在青贮发酵30天时,未发现植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,而有梭菌（Clostridiumsp.）存在,青贮饲料发酵品质恶化。综上所述,傍晚时刈割的意大利黑麦草具有最好的发酵品质和消化量,而中午时刈割的牧草受附着微生物种类和活性的影响发酵品质最差。2不同刈割时间对象草发酵品质的影响本试验旨在研究象草化学成分和微生物数量的日间变化,及其对青贮饲料发酵品质和体外消化量的影响。象草（第一茬,营养生长期）分别于2011年7月30日（第1次试验）,2012年7月19日（第2次试验）和7月25日（第3次试验）,在早上（08:00 h,AM）,中午（13:00 h,M）和傍晚（18:00 h,PM）刈割,取样分析并调制青贮饲料,分别于青贮后1、3、5、7、14和30天（第1次试验）,1、3、5、7和30天（第2次试验）和30天（第3次试验）开窖,取样分析并测定体外消化量。使用DGGE分析刈割第1天象草青贮前后细菌多样性。结果表明:从早上到傍晚,象草DM和WSC含量逐渐增加,而NDF和ADF含量逐渐减少。AM时象草附着有氧细菌和乳酸菌数量显著（P<0.05）高于M和PM时的牧草。青贮发酵30天后,PM时刈割的象草调制的青贮饲料与AM和M时的牧草青贮饲料相比具有较好的发酵品质,其DM、WSC、乳酸含量和LA/AA较高（P<0.05）,而青贮饲料pH、NH3-N含量和乳酸菌数量较低（P<0.05）。另外,PM时刈割的意大利黑麦草青贮饲料体外DM-D较高（P<0.05）。在青贮过程中,各刈割时间象草青贮饲料均能建立稳定的乳酸菌发酵体系,植物乳杆菌（L.plantarum）,乳酸乳球菌（Lactococcus laactis）和蒙氏肠球菌（Enteracocus mundtii）成为发酵末期的优势菌群。综上所述,随着日间刈割时间的延迟,象草水溶性碳水化合物含量提高,其青贮饲料发酵品质和干物质体外消化量逐渐改善。3青贮饲料中乳酸菌的分离及鉴定本试验选用2011年5月5日刈割的意大利黑麦草和2011年7月30日刈割的象草,经5 d和30 d发酵的青贮饲料进行乳酸菌的分离。两种牧草青贮饲料各分离得到菌株12株,经过表型特征,不同温度、pH和盐浓度生长,不同糖发酵底物和生长产酸速率筛选鉴定,选取8株乳酸菌通过测定16SrRNA序列,进一步鉴定属种。结果显示:菌株R5-1,R5-2,R5-5和R5-9分别为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,戊糖乳杆菌（Lactobbacillus pentosus）,蒙氏肠球菌（E.mundtii）和肠膜明串珠菌（Leuconostoc.mesenteroides）,菌株R30-1,N30-1,N30-3和N30-6均为植物乳杆菌（L.plantarum）。选取同型发酵菌株R5-1,R5-2,R5-5,R30-1和N30-6作为青贮饲料添加剂用于后续研究。4乳酸菌对不同刈割时间意大利黑麦草和象草青贮发酵品质的影响本试验由两个组成。试验一研究了 4种同型发酵乳酸菌（屎肠球菌R5-1,E.faeciuE.戊糖乳杆菌R5-2,L.pentosus;蒙氏肠球菌R5-5,mundtii 和植物乳杆菌R30-1,L.plantarum）添加剂对日间不同刈割时间意大利黑麦草青贮饲料发酵品质的影响。结果表明:青贮1,3,5,7和30d后,4种乳酸菌均显著提高了（P<0.05）意大利黑麦草青贮饲料的DM,乳酸,WSC含量和LA/AA,均显著降低了（P<0.05）青贮饲料的pH和NH3-N含量,提高了青贮饲料的发酵品质,且两株杆菌的改善效果优于两株球菌。而早上刈割的意大利黑麦草中,除添加植物乳杆菌R30-1（L.plantarum）能显著（P<0.05）降低青贮饲料的pH和氨态氮含量外,其余处理对青贮饲料品质均没有改善作用;傍晚刈割的意大利黑麦草中,添加屎肠球菌R5-1（E.faecium）和蒙氏肠球菌R5-5（E.mundtii）未能显著改善其青贮饲料的发酵品质,而添加戊糖乳杆菌R5-2（L.pentosus）和植物乳杆菌R30-1（L.plantarun）具有明显的改善作用。试验二研究了2种同型发酵乳酸菌（屎肠球菌R5-1,E.faecium和植物乳杆菌N30-6,L.plantarum）添加剂对日间不同刈割时间象草青贮饲料发酵品质的影响。结果表明:青贮1,3,5,7和30d后,添加植物乳杆菌N30-6（L.plantarum）降低了（P>0.05）所有象草青贮饲料pH、乙酸和NH3-N含量,显著提高了（P<0.05）LA/AA;添加屎肠球菌R5-1(（E.faecium）降低了（P>0.05）中午（13:00）和傍晚（18:00）刈割的象草青贮饲料pH和NH3-N含量,提高了（P>0.05）WSC含量和LA/AA,青贮饲料品质稍有改善;而添加此种菌提高了（P>0.05）早上（08:00）刈割象草青贮饲料的NH3-N和乙酸含量,降低了（P>0.05）WSC含量和LA/AA,发酵品质未改善。综上所述,添加同型发酵乳酸菌的改善效果依次为:中午>傍晚>早上;乳酸杆菌在各刈割时间均有改善作用,其添加效果优于肠球菌;肠球菌在早上刈割的牧草中添加未能改善青贮饲料的发酵品质,牧草附着乳酸菌活力存在日间变化规律为:早上>傍晚>中午。