豆豉及黑豆中异黄酮提取与检测研究

论文摘要

浏阳豆豉是以黑豆为原料经发酵而成。本文以浏阳豆豉及黑豆为研究对象,研究了超声波乙醇提取大豆异黄酮的工艺,并对异黄酮的纯化工艺进行了探索,同时对异黄酮的HPLC-MS检测条件进行研究。本文旨在通过对豆豉及黑豆中异黄酮的研究,充分认识其营养价值,为进一步研究提供数据。其主要研究结果如下。1超声波乙醇提取大豆异黄酮工艺采用超声波乙醇提取的方法对大豆异黄酮的提取工艺进行了研究。选择提取温度、乙醇浓度、料液比、超声波时间为考察因素,做正交试验设计,确定超声波浸提的最佳工艺条件。研究结果为乙醇浓度为60%、料液比为1：8、时间为30min、温度为80℃。根据极差值分析可知,各试验因素对大豆异黄酮得率的影响顺次为：乙醇浓度>料液比>提取时间>提取温度。在此条件下,黑豆提取大豆异黄酮得率为3.413%,豆豉提取大豆异黄酮得率为3.237%。用紫外分光光度法建立了大豆异黄酮含量的测定方法,回归方程为：A=0.0827X+0.0109,R2=0.9993（A为吸光度,X为总大豆异黄酮浓度,mg/1）,因此,吸光度与大豆异黄酮浓度之间有良好的相关性。2豆豉中异黄酮的定性定量分析通过对豆豉中大豆异黄酮色谱条件试验,建立如下色谱条件：色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C8,4.6nm×15cm,温度：35℃,流速为1mL/min,进样量为5μL。在20 min内得到分离度很好的6种异黄酮,分别是大豆苷、染料木苷、乙酰型大豆苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素。其中大豆苷的保留时间为2.459min,染料木苷的保留时间为3.141min,大豆苷元保留时间为9.836min,染料木素的保留时间为15.812min.用甲醇和水为流动相,在0-10min内流动相A：B=30：70,10-20min时变为70:50.梯度洗脱。测得豆豉中总异黄酮含量为0.149%,大豆苷含量为0.0008%,染料木苷含量为0.0024%,大豆苷元含量为0.0275%,染料木素含量为0.0379%。3黑豆中异黄酮的定性定量分析通过对黑豆中大豆异黄酮色谱条件试验,建立如下色谱条件：色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C8,4.6nm×15cm,温度：35℃,流速为ImL/min,进样量为5μL。黑豆的液相色谱在13-22min内得到9种异黄酮,分别是大豆苷、丙二酰型大豆苷、黄豆黄苷、丙二酰型黄豆黄苷、丙二酰型染料木苷、乙酰型染料木苷、染料木素、大豆苷元、黄豆黄素。其中大豆苷的保留时间为13.874min,大豆苷元保留时间为20.184min,染料木素的保留时间为21.412min.用甲醇和水为流动相,在0～18min内A：B=30：70,18-25min时流动相变为70：50,线性梯度洗脱。全黑豆中异黄酮的含量为0.183%,大豆苷元含量为0.013%,染料木素含量为0.018%,大豆苷含量为0.035%,丙二酰型染料木苷含量为0.034%,丙二酰型黄豆黄苷含量为0.036%,乙酰型染料木苷含量为0.028%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1 引言
• 2 大豆异黄酮的研究现状
• 2.1 大豆异黄酮的结构、组成
• 2.2 大豆异黄酮的分布及来源
• 2.3 大豆异黄酮的代谢与吸收
• 2.4 大豆异黄酮的生理功能
• 2.4.1 抗肿瘤作用
• 2.4.2 预防心血管病作用
• 2.4.3 抗炎作用
• 2.4.4 预防骨质疏松症作用
• 2.4.5 防老年痴呆作用
• 2.4.6 其他方面作用
• 2.5 大豆异黄酮提取方法
• 2.5.1 有机溶剂萃取法
• 2.5.2 大孔树脂吸附法
• 2.5.3 超声波法
• 2.5.4 微波萃取
• 2.5.5 超临界流体萃取
• 2.6 大豆异黄酮的检测方法
• 2.6.1 紫外分光光度法
• 2.6.2 高效液相色谱法
• 2.6.3 高效液相色谱-质谱法
• 2.6.4 气相色谱法
• 2.6.5 毛细管电泳法
• 2.6.6 薄层扫描色谱法
• 2.6.7 双向纸层析色谱法
• 2.6.8 免疫测定法
• 3 大豆异黄酮的开发与应用
• 3.1 国内开发现状
• 3.2 国外开发现状
• 4 大豆异黄酮在保健食品中的应用
• 5 研究的目的、意义
• 6 研究的主要内容
• 第二章 大豆异黄酮提取工艺研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验仪器与设备
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 大豆异黄酮提取工艺路线
• 1.3.2 操作要点
• 1.3.3 大豆异黄酮超声波辅助提取试验设计
• 1.3.4 大孔吸附树脂纯化工艺研究
• 1.3.5 大豆异黄酮的测定方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 不同浸提条件对大豆异黄酮得率的影响
• 2.1.1 乙醇浓度对提取率的影响
• 2.1.2 提取温度对提取率的影响
• 2.1.3 液料比对提取率的影响
• 2.1.4 超声时间对提取率的影响
• 2.1.5 乙醇提取异黄酮的正交试验结果
• 2.2 大孔树脂柱上异黄酮洗脱工艺参数的确定
• 2.3 样品异黄酮含量的测定
• 2.4 加样回收率的测定
• 3 小结
• 第三章 豆豉中异黄酮定性定量研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验仪器与设备
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 标准样品溶液的配制
• 1.3.2 色谱条件的选择
• 1.3.3 质谱条件的确定
• 1.3.4 回收率试验
• 1.3.5 精密度试验
• 1.3.6 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 标准曲线的绘制
• 2.2 色谱条件的确认与色谱峰的确认
• 2.3 豆豉中异黄酮的质谱定性分析
• 2.4 豆豉中异黄酮的含量
• 2.5 精密度试验
• 2.6 加样回收率试验
• 3 小结
• 第四章 黑豆中异黄酮定性定量研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 实验仪器与设备
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 标准样品溶液的配制
• 1.3.2 色谱条件的选择
• 1.3.3 质谱条件的确定
• 1.3.4 回收率试验
• 1.3.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 标准曲线的绘制
• 2.2 色谱条件与色谱峰的确认
• 2.3 黑豆中异黄酮的质谱定性分析结果
• 2.4 黑豆中异黄酮含量测定
• 2.6 加样回收率试验
• 3 小结
• 第五章 全文结论
• 1 超声波乙醇提取大豆异黄酮工艺
• 2 豆豉中异黄酮的定性定量分析
• 3 黑豆中异黄酮的定性定量分析
• 4 豆豉与黑豆中大豆异黄酮对比
• 5 论文创新点
• 展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历