新型的支原体固体培养基及方法在临床上的初步应用

论文题目: 新型的支原体固体培养基及方法在临床上的初步应用

论文类型: 硕士论文

论文专业: 皮肤性病学

作者: 李婷

导师: 叶元康

关键词: 固体培养基,新型的培养组件,支原体,液体培养基

文献来源: 同济大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的：从临床标本中成功的分离培养到支原体是明确诊断和进行科学研究的基础。支原体培养基分为液体培养基和固体培养基，相应的支原体分离培养方法为液体培养法和固体培养法。目前，国内对支原体的临床检测采用液体培养法，这一方法已经延用近20年，但在临床实践中已暴露出很多缺陷。固体培养法可以通过显微镜观察支原体特有的菌落形态，是微生物诊断的直接证据，没有假阳性存在，是一种科学的检测手段。由于支原体在固体培养基上菌落形态小需靠显微镜放大观察且生长环境需要CO2，所以固体培养法在营养、技术和配套设备上都比液体培养法要求高。本课题旨在研制一种适合临床检测支原体用的固体培养基和培养方法并进行初步的临床应用。方法：在原实验室已有的液体培养基配方基础之上添加DMEM，以青霉素为主要的抑菌成份，分别配制Uu、Mh、Mp液体培养基和琼脂浓度为0.9％的固体培养基。固体培养基一部分倾注于自行设计的培养组件内，称为新型固体培养基，另一部分倾注于培养常用的平皿中，相对前者称为常规固体培养基。应用新配制好的培养基对各种临床标本进行以下实验：①52例泌尿生殖道标本同时接种在有和无DMEM的两种Uu液体培养基。②四种支原体标准株接种在固体培养基和液体培养基。③46例泌尿生殖道标本直接划在固体培养基表面后洗脱在Uu液体培养基和Mh液体培养基中；另20例标本直接划在无青霉素的固体培养基后洗脱在Uu液体培养基中。④43例泌尿生殖道标本同时同量接种在常规固体培养基和新型固体培养基。⑤RA患者的SF、滑膜、血液和泌尿生殖道及咽拭子均用高营养的液体培养基和固体培养基培养支原体，前三种标本抽提DNA做PCR以便复核培养结果。所有液体培养基放在隔水式电热恒温培养箱内培养，常规固体培养基放在CO2培养箱中培养，新型固体培养基放一粒CO2发生片后放在隔水式电热恒温培养箱内培养。分离培养Uu和Mh的临床标本需连续观察3天，分离Mf和Mp的临床标本需连续观察一个月。低倍显微镜下观察到支原体特征性菌落为培养“阳性”。结果：①含DMEM的Uu液体培养基分离培养Uu的阳性率明显高于无DMEM的Uu液体培养基，差异有显著性（P＜0.05）。②四种支原体标准株菌落形态各具特征性，Uu和Mh 40小时内长出菌落，Mf和Mp 5天长出菌落。Mf和Mp均能分解葡萄糖使Mp液体培养基颜色变黄。③用固体培养基从泌尿生殖道标本中初代分离培养Uu和Mh就可以得到典型的菌落，大部分菌落可在24～40小时之间作出判断，48小时之后几乎不再有Uu和Mh菌落出现。液体培养基和固体培养基分离培养Uu和Mh的阳性率差异无显著性（P＞0.05）。有和无青霉素的固体培养基的污染率差异有显著性（P＜0.05），同样都用青霉素作为抑菌成份的固体培养基和液体培养基的污染率差异有显著性（P＜0.05）。④新型固体培养基与常规固体培养基从临床标本中分离培养Uu和Mh的阳性率差异无显著性（P＞0.05）。凡可见uu菌落者的新型固体培养基颜色均变为浅紫红色。⑤用新研制的培养基能使难培养的Mf和Mp标准株良好生长，但未能从RA患者的各种临床标本中分离培养到Mf或Mp，PCR检测也未扩增出支原体属特异性条带。结论：新型的支原体固体培养基在配方上不同于目前国内外培养基，该培养基因为添加了青霉素，所以选择性强，因为添加了DMEM和硫酸锰，所以支原体菌落出现早，特征明显易于判断。临床上的初步应用可证明固体培养基能够替代液体培养基检测Uu和Mh，难培养的Mf和Mp标准株也可以在该培养基上良好生长，但是，从临床标本中直接分离培养Mf和Mp尚需扩大样本继续研究。新型的培养组件用的培养基体积是平皿的三分之一，其组装后是一密封装置，里面放一粒CO2发生片可以使培养基在隔水式电热恒温培养箱内培养，其长扁方形的透明塑料外壳可以平稳地放在显微镜的载物台上，能用4×和10×物镜观察支原体菌落。临床上的初步应用可证明这种培养组件可替代平皿，从而替代CO培养箱。新型固体培养基具有Uu液体培养基一样的生化反应鉴定能力，因其污染少颜色判断会更准确，可以克服液体培养基常见的假阳性和假阴性的缺点。总之，新型的支原体固体培养基配方独特并且采用新型的培养方式，在实际临床应用上比液体培养基更适合用分离培养Uu和Mh。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

目录

符号说明

前言

材料与方法

1.1 材料

1.1.1 培养基原材料

1.1.2 试验所需耗材和器材

1.1.3 分子生物学所需材料

1.1.4 试验所用标准株

1.1.5 标本来源

1.2 试验方法

1.2.1 支原体培养基的制作

1.2.2 支原体标准株在培养基中的培养

1.2.3 有和无DMEM的液体培养基对临床分离Uu的对比

1.2.4 用固体培养基直接分离培养Uu和Mh的研究

1.2.5 RA患者各种标本中的支原体检测的培养法

1.2.6 RA患者的关节液、滑膜组织和血液标本的PCR检测

结果

2.1 培养基增加DMEM后的影响

2.2 支原体标准株的菌落形态和液体生化反应

2.3 固体培养和液体培养用于临床检测的对比

2.4 新型固体培养基用于临床检测Uu和Mh的结果

2.5 培养法对RA患者各种标本中分离培养支原体的结果

2.6 PCR结果

讨论

结论

照片

致谢

参考文献

个人简历 在学期间待发表和已发表的综述和论文

个人简历

在学期间待发表的论文

在学期间已发表的综述和论文

发布时间: 2008-01-02

参考文献

• [1].MODS在分枝杆菌分离培养和药物敏感性测定中的应用研究[D]. 梁博文.北京市结核病胸部肿瘤研究所2009

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