论文摘要
我们在近生理条件下（150mmol/LKCl、2mmol/LMgCl2、pH7.5,37℃）以EB为外源荧光探针测定10-23脱氧核酶和8-17脱氧核酶切割底物反应的动力学参数。在单转化条件下,脱氧核酶切割RNA 底物的反应是一个一级反应。在高浓度EB 存在的条件下,反应体系的荧光强度与体系中未被切割的底物的量（实质上是酶-底物复合物的量）有较好的线性关系,反应体系的荧光强度随时间的变化实际上反映了切割反应的进程。因此测定反应过程中不同时刻体系的荧光强度,即可获得切割反应进程的信息,从而求出反应的动力学参数。 本文采用上述方法在不同的EB 浓度下分别测定了一种10-23脱氧核酶和一种8-17 脱氧核酶的切割反应动力学参数,实验结果表明:与文献报道的方法相比(kobs10-23=0.16min-1, kobs8-17=0.11min-1),采用本方法测得的反应动力学参数(kobs10-23=0.12min-1, kobs8-17=0.08min-1)更接近于经典方法的测定结果(k210-23=0.13min-1, k2 8-17 =0.08min-1)。这表明,该方法更适合于在生理条件下简单、快速、准确地研究脱氧核酶的反应动力学问题。
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