论文摘要
背景MiroRNAs（miRNAs）是一类广泛存在于植物、动物以及病毒等真核细胞生物中不编码蛋白质的内源性单链小分子RNA,长约21– 25 nt。miRNA与靶mRNA的3′UTR碱基配对,通过抑制靶mRNA的翻译或使其直接降解,使靶基因在转录后水平沉默,从而调控靶基因的表达。miRNA参与了动物、植物许多复杂的生命过程,如生长发育、器官形成、细胞增殖、细胞凋亡等。有研究表明,miRNAs表达异常与恶性肿瘤发生、发展密切相关,关于肿瘤的诊断和治疗的研究也有望从miRNAs中找到新的突破口。骨肉瘤是我国发病率最高的原发恶性骨肿瘤,青少年高发,转移早,约一半的骨肉瘤患者发病时就已出现肺部转移,当前,影响骨肉瘤患者治疗效果,甚至导致患者死亡的首要因素就是骨肉瘤的转移。在本实验室建立了人骨肉瘤细胞系SOSP-9607后,利用已有的SOSP-9607细胞系克隆筛选出了两种亚细胞系: F5、F4,前一种细胞为高增殖转移率细胞系,后一种细胞为低增殖转移率细胞系,分别具有不同的增殖转移能力。应用基因芯片技术对两种细胞分别进行了差异miRNA分析后,发现了一些差异表达的miRNA。miR-194是在高增殖转移率细胞系F5中高表达的众多miRNA分子之一（约4倍）。本实验以miR-194为目标,研究miR-194的在骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中的生物学功能变化,为进一步研究其作用机制,为其在骨肉瘤预后判断和治疗等方面的临床应用提供理论基础。目的观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP9607细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。方法（1）将SOSP9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物（hsa-miR-194 mimics）转染成骨肉瘤细胞系SOSP9607,增强SOSP9607细胞内miR-194的活性。（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制三组细胞生长曲线。（3）流式细胞仪测定SOSP-9607细胞转染miR-194模拟物后实验组与对照组细胞凋亡的变化。流式细胞仪测定SOSP-9607细胞转染miR-194模拟物后实验组与对照组细胞周期的变化。（4）通过transwell侵袭实验及迁移实验评估SOSP-9607细胞转染miR-194模拟物后实验组与对照组的转移能力的变化。结果（1）MTT法检测显示,与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。（P<0.01）（2）流式细胞仪测定SOSP-9607细胞转染miR-194模拟物后实验组与对照组细胞凋亡率,阴性对照组凋亡率（3.3±0.19）%,实验组凋亡率（10.1±0.22）%,两者相比实验组凋亡率明显增高（P<0.01）。流式细胞仪检测周期显示,SOSP-9607细胞转染miR-194模拟物后实验组相比对照组细胞G0/G1细胞比例显著增加, S期细胞与G2/M期细胞比例显著减少（P<0.01）。（3）Transwell侵袭和迁移实验结果显示,与对照组相比,实验组细胞的侵袭和迁移能力均明显提高,两对照组之间没有显著差别P<0.01（n=3）。结论通过转染miR-194模拟物增强SOSP9607细胞中miR-194的活性,对SOSP9607细胞的增殖、凋亡、细胞周期侵袭和迁移能力造成显著影响,其具体的作用机制需要进一步的研究。