论文摘要
一、目的考察小鼠体内分别给予生理盐水、胡椒碱及维拉帕米后,对去甲替林多剂量药动学和脑/血浓度比值的影响,探讨作为生物利用度增强剂的胡椒碱对进入血脑屏障药物的影响,是否会影响去甲替林的疗效或对治疗窗小的药物产生毒性作用。对指导临床用药具有一定的意义。二、方法1.实验动物及给药方法1.1实验动物分组选用清洁级健康成年雄性昆明种小鼠216只（25±3 g）,按完全随机分组设计分为四大组,每组54只（6/组×9个时间点）：低剂量胡椒碱组（L）,高剂量胡椒碱组（H）,维拉帕米组（V）,生理盐水组（B）。四组均于最后一天腹腔注射去甲替林。1.2给药剂量本试验维拉帕米剂量为5 mg/kg,去甲替林为15 mg/kg。黑胡椒中胡椒碱的含量大约为5%-9%,在人体中,大约每天食入胡椒碱的用量大约为60-110μmol。按照人体每日摄入胡椒碱的量换算至小鼠后,所得剂量为170μg/kg,此剂量即为本实验低剂量组所给予的胡椒碱的用量。根据文献报道,小鼠试验中,胡椒碱药物相互作用中所用到的剂量,且文献报道此剂量对小鼠不会产生毒性。且为了与维拉帕米对照组进行比较,我们选用5mg/kg的剂量为高剂量组用量。1.3样品采集小鼠适应性喂养一周后,按照分组,四大组分别连续7天灌胃给予低剂量胡椒碱（170μg/kg）,高剂量胡椒碱（5 mg/kg）,维拉帕米（5mg/kg）及生理盐水0.4 m1。第一8天,试验前一天禁食12 h后,继续灌胃给予以上药物,1h后,腹腔注射给予去甲替林（15 mg/kg）后,分别于5,15,30min,1,2,4,6,8,12 h摘除眼球采血。血液置于肝素抗凝EP管内,15000 rm/min离心制备血浆。小鼠处死后快速取出小鼠脑组织,脑组织用生理盐水洗净,滤纸吸干表面水分,称重。血浆及脑组织样品均于-70℃冰箱保存待测。2.生物样品测定方法采用UPLC-MS/MS法测定血浆和脑组织匀浆液中去甲替林浓度。3.数据处理以Excel及SPSS 13.0统计软件分析处理,小鼠血浆及脑组织AUC及脑血比值面积使用单因素方差分析检验；t1/2使用多个独立样本非参数检验。三、结果1.方法学1.1去甲替林的测定方法学血浆及脑组织中去甲替林与内标氯米帕明分离良好。血浆及脑组织内去甲替林和内标保留时间分别为1.42 min和1.93 min。在5.00～5000.00 ng-mL-1线性范围内各待测物在血浆及脑组织中的线性良好,最低定量限为5 ng-mL-1。若有超过线性范围的浓度,使用空白血浆稀释后,按血浆样品处理方法处理后进样,所得浓度乘以稀释倍数即为血浆药物浓度。血浆中萃取回收率各待测物>78.66%,脑匀浆中各待测物>78.34%,血浆和脑匀浆日内精密度RSD为2.94%-9.30%：日间精密度RSD为3.00%-7.85%。低,中,高三种浓度的质控样品稳定性良好,浓度变异均小于9.27%。2.小鼠腹腔注射去甲替林后,测得去甲替林在小鼠体内的药物代谢动力学及脑/血浆药物浓度的比值。B、L、H和V组中去甲替林在血中AUCO-12分别为3645.77+778.60,4527.37±938.29,3989.90±307.15,6338.88±974.8 ng-h-mL-1;AUCO-∞分别为3042.05±765.31,3825.07±1090.70,3185.37±922.61, 5155.18±1205.12 ng·h·mL-1;t1/2分别为2.62±1.36,2.75±1.22,3.37±1.62, 3.78±2.44 h;统计结果表明,V组的AUCO-12及AUCO-oo和B、L、H组相比有显著性差异（P<0.05）,而四组t1/2均没有统计学差异。脑匀浆液中AUCO-12分别为19750.33±2281.08,22353.33±2751.84,20200.07±2838.54,41162.40±7836.38 ng-h-g-1; AUC0-∞分别为19219.22±2471.23,20919.67±3485.21, 19660.18±2843.12,37458.47±10339.38 ng-h-g-1;t1/2分别为1.82±0.37, 2.30±1.14,1.77±0.40,2.33±1.06 h;统计结果表明,V组的AUCO-12及AUCO-oo和B、L、H组相比有显著性差异（P<0.05）,而四组t1/2均没有统计学差异。脑血比（AUC brain/AUC blood）为59.61±9.93,42.35±5.48, 59.03±6.99,67.47±10.10 ml-g-1;L和B、H、V之间有统计学差异,但L组比值小于其余三组,而B、H和V组之间没有统计学差异。四.结论1.方法学本实验方法可准确、快速测定小鼠血浆及脑匀浆中去甲替林的浓度,用以考察胡椒碱对去甲替林透过血脑屏障的影响。2.动物实验长期给予胡椒碱后,胡椒碱使得小鼠体内去甲替林在血浆和脑中的药物浓度增加,但没有统计学意义。而对于更具意义的脑血比值来说,低剂量胡椒碱组脑血比值低于其余三组,且有统计学差异,低剂量的胡椒碱可能对P-gp在脑组织中存在诱导作用；高浓度的胡椒碱对血脑屏障上P-gp作用较小。P-gp的抑制剂维拉帕米能够抑制P-gp的功能,增加去甲替林血浆和脑组织中去甲替林的浓度,但其脑血比较生理盐水组没有显著性差异。由于低剂量胡椒碱组剂量是按照正常人每日使用的量换算而来,同时试验结果看出胡椒碱能显著降低去甲替林脑血比值,可能对血脑屏障上P-gp存在诱导作用。故在临床使用中枢药物时,可能会发上P-gp介导的药物相互作用,影响药物疗效,应避免食入含胡椒碱的食物。