论文摘要
本实验以湖桑32桑树枝条皮为材料,用醇水溶液浸提方法制备桑枝皮醇溶物（MBBEE）。采用有机溶剂萃取和大孔树脂吸附两种分离方法对桑枝皮醇溶物有效成份进行分离与纯化,并对MBBEE及其各个组分进行总黄酮、总酚、总糖、总单宁酸及游离氨基酸含量的测定及体外生物活性探究。MBBEE经有机溶剂萃取可分成石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和剩余水相五个部分,其中正丁醇相和水相为主要组份,其对DPPH自由基清除能力的抑制中值(IC50)分别为0.16 mg/mL和0.10 mg/mL;正丁醇相对酪氨酸酶的抑制作用远远高于其它萃取组分,IC50值达到5.2μg/mL,而水相对α-葡萄糖苷酶的抑制活性最强,其IC50值为2.5μg/mL。MBBEE经D101大孔树脂吸附分离后,获得占质量比为44%穿透相、34%水洗脱相、21%醇水相（30%乙醇溶液洗脱部分）和2%乙醇相（无水乙醇溶液洗脱部分）四个部分。应用高效液相色谱法对MBBEE及其四个部分游离糖类、1-脱氧野尻霉素（DNJ）、槲皮素、芦丁及白藜芦醇等重要成份含量进行了测定。穿透相和水洗脱相的游离氨基酸含量分别达到14568μg/g和17902μg/g,其中γ-氨基丁酸的含量分别为580μg/g和518μg/g,果糖含量分别为177.30 mg/g和129.15 mg/g,具有α-葡萄糖酶抑制活性的DNJ含量分别为1.9 mg/g和0.76 mg/g,槲皮素含量分别为46.05 mg/g和56.03 mg/g。与MBBEE原有α-葡萄糖苷酶抑制活性(IC50值为2.75μg/mL)相比,经大孔树脂吸附后这种抑制活性主要集中在穿透相和水洗脱相,其IC50值分别为1.7μg/mL和2.3μg/mL。醇水相中糖类含量最高的是鼠李糖,为233.95 mg/g;槲皮素及芦丁的含量分别为69.52 mg/g、62.19 mg/g;且醇水相对酪氨酸酶的抑制作用及对DPPH自由基的清除能力都远远高于MBBEE及其它组分,IC50值分别达到0.25μg/mL和142μg/mL。本实验还采用半制备HPLC法对醇水相中主要成分（F2色谱峰）进行了分离、纯化和制备,经LC-MS、UV光谱、荧光光谱、1H NMR和13C NMR波谱分析,鉴定该成分为氧化白藜芦醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,即桑皮苷A（Mulberroside A）。活性分析表明桑枝皮醇提物及其醇水相对DPPH自由基的清除能力及酪氨酸酶的抑制活性主要来自桑皮苷A,其IC50分别为35.33μmol/L和0.07 nmol/L。实验结果表明,桑枝皮醇溶物含有包括芦丁、槲皮素、DNJ、白藜芦醇以及γ-氨基丁酸等在内的多种生物活性物质,其总量近八成的D101树脂穿透相和水洗脱相具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,而占总量二成的醇水相部分具有很强的抑制酪氨酸酶的活性,其主要成分为桑皮苷A。所以,桑枝皮醇溶物不仅可以作为降血糖的生物药物广泛应用于糖尿病及其迸发症的治疗,而且在高级美白化妆品等方面也有潜在的应用价值。
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