论文摘要
目的观察高葡萄糖和高软脂酸联合应用对人血管内皮细胞凋亡的作用效果，并探讨其机制。方法高糖与高软脂酸单独及联合作用于人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）48小时，应用Annexin V／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率，Hoechst33342荧光染色观察凋亡形态学变化，高压液相色谱联合质谱检测细胞内神经酰胺含量，分光光度法检测半胱天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate specific protease-3，Caspase-3）活性。结果高糖与高软脂酸单独及联合应用均可导致HUVECs出现凋亡的形态学变化。两者联合应用时的凋亡率高于各自单用（P＜0.05）。细胞内神经酰胺含量在高糖与高软脂酸单独及联合应用时均较对照组升高（P＜0.05），联合应用时升高最为明显（P＜0.05）。神经酰胺合成酶抑制剂myriocin能显著降低高糖与高软脂酸联合应用导致的细胞凋亡率（P＜0.05）。Caspase-3活性在高糖与高软脂酸单独及联合应用时均较对照组升高，联合应用时升高最为明显（P＜0.05）。Caspase-3特异性抑制剂zDEVD-fmk能显著降低高糖与高软脂酸联合应用导致的细胞凋亡率（P＜0.05）。神经酰胺合成酶抑制剂myriocin能显著抑制高糖与高软脂酸联合应用导致的Caspase-3活性改变（P＜0.05）。结论高糖、高软脂酸联合应用能协同诱导人血管内皮细胞凋亡。神经酰胺、Caspase-3参与了高糖和高软脂酸协同诱导的血管内皮细胞凋亡。Caspase-3可能是该协同过程中神经酰胺的下游成分。