论文摘要
松籽壳多糖（Polysaccharide from Pine Seed Shell,PPSS）作为一种新型活性多糖可提高机体免疫力,具有多方面生物活性,如抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化等。本试验采用水提法从红松松籽壳中提取了活性多糖。通过调整浸提温度、时间、固液比和浸提次数等单因素,以提取物中糖含量评价提取效果,确定了正交实验设计分析的因素水平,经正交实验设计分析得出最佳提取条件为温度80℃,时间3h,固液比为1:2,浸提2次。以奥尼罗非鱼为实验对象,分别以0%（对照组）、0.01 %、0.02 %、0.04 %的比例在饲料中添加PPSS,并另设两个实验组分别在饲料中添加0.02 %,0.04 %的人参多糖,同时以对照组和人参多糖为参照进行动物实验,饲养周期为56 d,定期称量体重,并取样测定其免疫及抗氧化指标。结果显示松籽壳多糖组和人参多糖组罗非鱼体重较对照组都有增加趋势,且差异显著（P<0.05）;人参多糖组与松籽壳多糖组血清SOD活力显著高于对照组（P<0.05）,证明松籽壳多糖与人参多糖一样具有抗氧化作用;脾脏抗菌活力及肝脏中溶菌酶含量测定证明,多糖组抗菌活力和溶菌酶含量高于对照组,并与对照组差异显著（P<0.05）,说明松籽壳多糖对奥尼罗非鱼具有免疫调节作用。为探讨松籽壳多糖对奥尼罗非鱼肝脏中溶菌酶表达的调控机制,通过Genbank已经登录的与罗非鱼种属关系较近的塞内加尔鳎（Solea senegalensis）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）C型溶菌酶序列对比,选取其中的的保守区,设计引物,PCR扩增获得到大小为160bp奥尼罗非鱼C型溶菌酶基因片段,与塞内加尔鳎、牙鲆、大菱鲆进行了同源性分析。将此片段与内参β-actin片段同管扩增,通过扩增产物的电泳条带灰度比检测了PPSS对奥尼罗非鱼C型溶菌酶表达调控的情况。
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