论文摘要
背景与目的:鼻咽癌是我国南方乃至东南亚地区最常见的恶性肿瘤之一,放化疗成为其主要的治疗手段,然而远期疗效并不理想,且存在一系列毒副反应。姜黄素是中草药姜黄的主要活性成分,可抑制体内外多种肿瘤细胞的生长,其抗癌谱广,毒副作用小,是一种具有良好应用前景的天然抗癌新药,且有研究报道可见光能增强姜黄素的细胞毒性,因此姜黄素可作为一种有效的光敏剂。大量研究表明,声动力治疗由于其穿透力强、毒副作用低等优点已成为继光动力治疗之后又一新兴的肿瘤治疗方法。然而,姜黄素能否作为增敏剂增强低强度超声用于肿瘤的治疗还有待阐明。本研究旨在通过探讨姜黄素增强低强度超声对鼻咽癌细胞株CNE2的杀伤效应及其可能机制,从而为姜黄素声动力治疗提供依据。材料与方法:采用倒置显微镜观察和MTT比色法检测姜黄素联合低强度超声作用后CNE2细胞的生长情况;同时利用测温仪对实验中细胞溶液的温度进行监测,以了解细胞溶液的温度变化情况;应用Hoechst33258细胞核荧光染色法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒观察和检测姜黄素联合超声作用对CNE2细胞凋亡的影响;通过透射电镜观察姜黄素联合超声作用后细胞超微结构的变化情况;利用Rhodamine123染色法了解细胞线粒体膜电位的变化情况;最后通过DCFH-DA染色检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成情况。结果:当姜黄素以10μM的浓度与CNE2细胞共同孵育1h后,再用剂量为0.46W/cm2×8s的超声处理,CNE2细胞的杀伤率比单纯姜黄素处理组及单纯超声处理组细胞杀伤率之和高出了一倍;倒置显微镜下观察,姜黄素联合超声处理组的细胞数量较其他三组明显减少,细胞固缩,并可见大量细胞碎片;实验中温度变化监测显示培养液温度随超声作用时间延长而有所升高,但在超声作用8s时升高幅度不超过5℃;Hoechst33258细胞核荧光染色显示姜黄素联合超声组在超声处理后6h出现最为明显的细胞凋亡,表现为细胞核凝聚,出现凋亡小体;同时Annexin V-FITC和PI染色后细胞凋亡检测发现姜黄素联合超声组在超声处理后6h细胞的坏死或晚期凋亡率为31.37%而早期凋亡率为2.91%。透射电镜观察到姜黄素联合超声组在超声处理后6h细胞出现坏死和凋亡小体,线粒体高度肿胀;Rhodamine123染色显示姜黄素联合超声组在超声处理后3h细胞内线粒体膜电位明显降低;最后DCFH-DA染色对ROS的检测结果为姜黄素联合超声组在超声处理后3h细胞内活性氧的含量较其他三组明显增多。结论:姜黄素能显著增强低强度超声对鼻咽癌细胞的杀伤效应,此效应可能是通过细胞内ROS的生成增多导致线粒体损伤从而诱导细胞凋亡来实现的。因此,姜黄素声动力治疗可作为鼻咽癌的一种新的治疗模式,姜黄素作为一种新型的增敏剂有潜在的推广和应用价值。