臭牡丹提取液对气道高反应疾病模型的药理作用的初步研究

论文摘要

气道高反应是一种常见的临床表现,主要见于支气管哮喘,慢性阻塞性肺疾病、病毒性上呼吸道感染等急慢性呼吸道疾病。现一般认为气道高反应的发病机制是气道炎症,故药物治疗手段主要是从抗炎和对症治疗两个方向进行防治,虽然这些药物可以治疗或缓解气道高反应,但不能解决病情反复发作和阻断气道结构重塑与肺功能衰退进程等问题。臭牡丹在传统医学中广泛用于治疗痈疽,疔疮,乳腺炎,关节炎,湿疹,头痛,牙痛等症,近年来也有报道臭牡丹提取液具有对抗迟发性超敏反应和细胞免疫的抑制作用以及缓解关节炎、肾炎、疟疾、镇痛催眠、缩宫等作用。因此,臭牡丹有可能具有作为治疗气道高反应性疾病药物开发的潜在价值。目的:研究臭牡丹作为潜在的治疗气道高反应性疾病新药的开发价值。方法:一、臭牡丹总提物的作用观察:1.提取臭牡丹总的有效成分,做成口服制剂。2.用臭氧应激建立新型的气道高反应小鼠模型,方法如下:将小鼠置于40cm×30cm×25cm塑料箱内,2.0ppm臭氧与新鲜空气混合导入箱中,臭氧应激5d,每天20min。3.将实验小鼠一共分为5组:正常对照组、药物对照组、模型组、药物治疗组和激素治疗组。4.通过测量小鼠气道反应性、支气管肺灌洗液(BALF)中的白细胞计数与分类、外周血中的白细胞计数与分类、BALF上清液中的乳酸脱氢酶的含量,观察肺脏病理切片气道与肺组织的病变程度来评价药物治疗效果;观察小鼠肝、肾组织的病理切片及外周血的白细胞计数来初步评估臭牡丹药物的毒性作用。5.通过血清药理学方法观察臭牡丹含药血清对永生化支气管上皮细胞株的增殖作用。二、臭牡丹活性成分的作用观察:1.分离提取臭牡丹的三种活性成分,即A类、B类和C类,并做其成分的预试检查;然后做成三种口服制剂。2.在臭氧应激气道高反应小鼠模型上(建模方法同上),用三种含不同臭牡丹活性成分的口服制剂给模型小鼠灌胃治疗。3.将实验小鼠一共分为5组:正常对照组、模型组、A类治疗组、B类治疗组和C类治疗组。4.通过测量小鼠气道反应性、支气管肺灌洗液(BALF)中的白细胞计数、外周血中的白细胞计数、BALF上清液中的总蛋白的含量,观察肺病理切片的气道与肺组织的病变程度来评价臭牡丹不同活性成分的治疗效果。结果:一、臭牡丹总提物的治疗作用效果:1.在不同浓度的乙酰甲胆碱激发状态下模型组小鼠的气道阻力(RL)比值均要明显高于对应的正常对照组小鼠的RL比值,说明造模成功。在不同浓度的乙酰甲胆碱激发状态下臭牡丹药物治疗组小鼠的RL比值均要明显低于对应的模型组小鼠的RL比值(P＜0.05),疗效达到激素治疗组水平。2.模型组小鼠的BALF中白细胞计数大于正常对照组的BALF中白细胞数目,药物治疗组小于模型组(P＜0.05)。白细胞分类观察发现,模型组小鼠BALF内增高的白细胞主要是粒细胞与淋巴细胞,药物治疗可降低粒细胞与淋巴细胞的数目(P＜0.05)。3.模型组小鼠外周血白细胞总数增高,药物治疗组的白细胞总数少于模型组(P＜0.05)。外周血的白细胞分类计数显示,模型组的中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞数目均要高于对照组(P＜0.05),药物治疗组的上述细胞数目均少于模型组(P＜0.05)。4.从BALF中乳酸脱氢酶(LDH)含量的趋势来看,模型组的LDH含量增高,药物治疗可以降低臭氧应激引起的增高的LDH含量。5.小鼠肺病理切片HE染色结果观察(观察指标包括上皮细胞脱落、管壁增厚、管壁平滑肌层增厚、管腔内分泌物量、周围血管及支气管炎症细胞渗出程度和肺泡结构改变程度),模型组的肺组织病理改变明显,药物治疗可减轻肺病变程度(P＜0.05)。6.肝、肾的病理切片HE染色后各组小鼠的肝和肾结构均未发现炎症改变或损伤,提示臭牡丹总提物对肝、肾无明显毒副作用。药物对照组与正常对照组的外周血白细胞总数相比较差别无意义,提示臭牡丹提取液无白细胞抑制作用、无明显全身性毒副作用。7.MTT法观察人支气管上皮细胞生长曲线,稀释二倍、一倍、未稀释的三组含药血清的活细胞数在接种后12h,36h,48h,3d,4d,5d六个时间点均要高于不含药小鼠血清组,提示含药血清可能具有促进支气管上皮细胞增殖的作用。二、臭牡丹中不同活性成分的治疗作用效果:1.在本轮实验中,在不同浓度的乙酰甲胆碱激发状态下模型组小鼠的气道阻力(RL)比值均要明显高于对应的正常对照组小鼠的RL比值,说明造模成功。C类治疗组与A类治疗组在不同浓度的乙酰甲胆碱激发状态下RL比值均要明显低于模型组(P＜0.05);B类治疗组只有在0.78mg/ml的乙酰甲胆碱激发状态下的RL比值明显低于模型组(P＜0.05),其它三种浓度的乙酰甲胆碱激发时的RL比值与模型组相比无差异。2.白细胞计数结果显示,模型组小鼠的BALF中白细胞计数要高于正常对照组(P＜0.05),C类治疗组与A类治疗组小鼠的BALF中白细胞计数要明显低于模型组(P＜0.05),B类治疗组小鼠的BALF中白细胞计数与模型组相比无统计学意义。3.模型组小鼠中外周血的总的白细胞数目大于正常对照组中外周血的白细胞数目,用药的三组的白细胞数均要少于模型组(P＜0.05)。4.BALF中的总蛋白含量可反映肺损伤程度。本次实验中,模型组的总蛋白含量增加,C类治疗组蛋白含量明显低于模型组。5.小鼠肺病理切片HE染色观察到,模型组小鼠有明显的肺组织结构改变,C类治疗组和A类治疗组的肺组织病变程度均要低于模型组(P＜0.05),B类治疗组与模型组相比较无统计学意义。结论:1.臭氧攻击能引起小鼠发生气道炎症反应、气道高反应和肺组织病理改变。臭牡丹总提物能够减轻臭氧攻击所造成气道与肺泡病理改变,炎症反应及气道高反应。2.含臭牡丹药物的小鼠血清可能具有促进支气管上皮细胞增殖的作用。3.臭牡丹中C类化合物可以减轻气道炎症、有非常明显的降低气道高反应和减轻臭氧应激引起的气道与肺损伤的功能,很可能是治疗气道高反应性疾病的有效部位。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 臭牡丹总提物对气道高反应小鼠模型的药理学作用
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 1.4 实验结果
• 1.5 讨论
• 1.6 结论
• 附图
• 第二章 臭牡丹总提物对细胞增殖的血清药理学研究
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学处理
• 2.4 实验结果
• 2.5 讨论
• 2.6 结论
• 第三章 针对气道高反应小鼠模型的臭牡丹活性成分药理效应比较
• 3.1 实验材料
• 3.2 药物活性成分提取、制剂与鉴定实验方法
• 3.3 药物活性成分鉴定结果
• 3.4 动物实验方法
• 3.5 统计学处理
• 3.6 动物实验结果
• 3.7 讨论
• 3.8 结论
• 附图
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果