胎盘组织TLRs表达与孕妇HBV感染关系的研究

论文摘要

目的:①从基因水平探讨正常孕妇和HBsAg阳性孕妇足月胎盘中TLR3、TLR4、TLR7、TLR9的差异;②探讨正常孕妇和HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织TLR3的分布;③从蛋白水平探讨正常孕妇和HBsAg阳性孕妇的TLR3的差异。方法:以2006年7月至2007年10月由太原市传染病院妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇和山西医科大学第一医院产科无妊娠并发症的足月产孕妇作为研究对象,从产前检查追踪观察至分娩,收集产前、产中及产后的流行病学基线资料,采集孕妇肘静脉血、新生儿出生24小时内未注射HBIG的股静脉血2ml,吸上清,-20℃保存备检;同时收集足月分娩当时无菌胎盘组织1.5cm×1.5cm×0.3cm（须包括胎盘从母面至胎儿面各层）两份,一份立即置于4%多聚甲醛中固定,常规石蜡包埋,做4-5μm切片备用;另一份立即置于-80℃保存备检。进行下述研究:①E LISA法检测孕妇血清HBsAg;②采用荧光定量PCR检测血清HBV DNA;③RT-PCR法检测胎盘组织中TLR3、TLR4、TLR7、TLR9基因表达水平;④免疫组织化学ABC法检测胎盘组织中TLR3的分布;⑤western-blot检测胎盘组织中TLR3蛋白表达水平;⑥资料输入Visual Fox Por 6.0数据库,采用SPSS 13.0 for windows软件进行统计分析。结果:①RT-PCR检测胎盘组织TLR3、TLR4、TLR7、TLR9基因的表达情况:在HBsAg阳性孕妇和正常孕妇的胎盘中均能检测到四种基因,TLR3 mRNA在HBsAg阳性孕妇的表达低于正常孕妇（t=3.003,P<0.05）。TLR4 mRNA、TLR7 mRNA、TLR9 mRNA在HBsAg阳性孕妇的表达均高于于正常孕妇（t=3.530,t=4.036,t=3.3834, P均<0.05）,TLR4、TLR7、TLR9基因在DNA阴性组和DNA阳性组差别均无统计学意义（t =4.60,t =3.50,t =1.236 ,P均>0.05）。②免疫组织化学法检测116例HBsAg阳性孕妇胎盘组织TLR3,85例阳性,阳性率为73.28%（85/116）。从母体面的蜕膜细胞至胎儿面的绒毛毛细血管内皮细胞,TLR3阳性率逐渐增加（趋势检验χ2=61.654,P=0.000）,蜕膜细胞（DC）、滋养层细胞（TC）、绒毛间质细胞（VMC）和绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）阳性率分别为30.17%（35/116）、45.69%（53/116）、70.69%（82/116）和73.28%（85/116）。其中,胎盘屏障（包括滋养层细胞和绒毛毛细血管内皮细胞）阳性率为73.28%。胎盘组织中TLR3呈棕黄色阳性信号,局灶性分布于被检胎盘的各型细胞中,大多位于胞浆,部分位于胞膜,偶见分布于胞核。41例正常孕妇胎盘组织TLR3全部阳性。TLR3在正常孕妇胎盘和HBsAg阳性孕妇胎盘分布经检验有统计学差异（Fisher’s确切概率P<0.05）。胎盘屏障TLR3分布在HBsAg阳性孕妇所生的胎儿是否会发生宫内感染经统计学检验有统计学意义（χ2=5.769,P=0.016）。③western-blot检测胎盘组织中TLR3蛋白表达水平, TLR3在正常孕妇和HBsAg阳性孕妇足月胎盘中均有表达,两组间比较差异有统计学意义（t=5.183,P=0.000）,正常孕妇组高于HBsAg阳性孕妇组。结论:①TLR3主要表达于胎盘细胞的胞浆,分布于胎盘各型细胞,且阳性率从母体面到胎儿面呈逐渐上升的趋势。TLR3 mRNA和TLR3蛋白在HBsAg阳性孕妇和正常孕妇的足月胎盘中均有表达,在HBsAg阳性孕妇的表达均低于正常孕妇组。胎盘组织TLR3表达与孕妇HBV感染有一定关系,TLR3高表达是孕妇HBV感染的保护因素,胎盘屏障TLR3表达是孕妇发生宫内感染的保护因素。②TLR4、TLR7、TLR9基因在HBsAg阳性孕妇和正常孕妇的足月胎盘中均有表达, TLR4 mRNA、TLR7 mRNA、TLR9 mRNA在HBsAg阳性孕妇的表达均高于正常孕妇,提示TLRs在病毒感染胎盘的免疫活动中可能起重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 胎盘组织TLR3 表达与HBV 感染关系的研究
• 实验一 RT-PCR 测定 TLR3 在 HBsAg 阳性孕妇胎盘上的表达
• 1. 对象与方法
• 2. 结果
• 实验二 免疫组织化学法测定 TLR3 在 HBsAg 阳性孕妇胎盘上的分布
• 1. 对象与方法
• 2. 结果
• 实验三 western-blot 测定TLR3 在 HBsAg 阳性孕妇胎盘上的分布
• 1. 对象与方法
• 2. 结果
• 讨论
• 第二章 TLR4、TLR7、TLR9 在足月胎盘上的表达
• 1. 对象与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 全文小结
• 研究特色
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢