甘肃棘豆生物碱部位含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

论文摘要

目的：研究棘豆生物碱部位药物血清对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及抗癌作用机制,为临床应用棘豆生物碱部位治疗肝癌提供实验依据和理论基础。方法：采用不同剂量组棘豆生物碱部位药液给家兔灌胃后制备高、中、低剂量组的含药血清,并用相同实验方法制备阳性对照组含药血清（5-氟尿嘧啶组含药血清）和生理盐水对照血清。用10%的高、中、低剂量组棘豆生物碱部位含药血清,10%的5-氟尿嘧啶组含药血清和10%的空白血清,分别作用于HepG2细胞不同时间：MTT检测棘豆生物碱部位含药血清对HepG2细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞周期的变化,Hoechst33342荧光染色观察其对HepG2细胞核的形态学变化并进行凋亡鉴定,倒置显微镜观察其对HepG2细胞形态学变化,荧光比色法测定棘豆生物碱部位含药血清对Caspase3的活性表达的影响,采用caspase3特异性的抑制剂Ac-DEVD-CHO （50mol/L）处理HepG2细胞30min后再加入10%棘豆生物碱部位含药血清作用后检测Caspase3的活性。结果：（1）棘豆生物碱部位药物血清能抑制HepG2细胞增殖,细胞增殖活性呈时间剂量依赖关系,以高剂量组药物血清作用最强,与阴性对照组比较有统计学意义（p<0.05）。（2）免疫荧光观察10%棘豆生物碱部位含药血清组细胞出现染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征且肿瘤细胞数量明显减少。阴性对照组细胞大小均匀,着色淡,细胞数目较多。5-氟尿嘧啶含药血清组肿瘤细胞减少且凋亡特征明显。（3）倒置显微镜观察,与对照组相比,10%高、中、低棘豆生物碱部位含药血清处理后,HepG2细胞变小,变圆,并悬浮于培养液中,胞浆透亮度下降,且细胞核颜色加深,折光性增强。（4）流式细胞仪检测高剂量药物血清组处理HepG2细胞后G1期细胞比例增多,而其他实验组S期细胞比例增多,与阴性对照组比较有统计学意义（p<0.05）。（5）荧光比色法测定可见棘豆生物碱部位含药血清作用于HepG2细胞后Caspase3活性明显增强,且随时间延长而升高,以48h活性达到最高,与对照组比较有统计学意义（p<0.05）。（6）荧光比色法测定,caspase3特异性抑制剂（?）Ac-DEVD-CHO （50mol/L）处理30min后再加入10%棘豆生物碱部位含药血清可见Ac-DEVD-CHO降低棘豆生物碱部位含药血清诱导凋亡过程中caspase3的活性。结论：本研究提示棘豆生物碱部位药物血清有抗肝癌的作用,并存在量效关系,其作用机制可能通过抑制HepG2细胞增殖、阻滞细胞周期及上调caspase3达诱导人肝癌细胞HepG2凋亡。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 细胞系
• 2.2 主要仪器
• 2.3 主要试剂
• 2.4 主要工作液
• 2.5 含药血清的制备
• 2.6 细胞培养
• 2.7 MTT法测定细胞增殖活性
• 2.8 流式细胞技术检测细胞周期
• 2.9 细胞凋亡形态学观察
• 2.10 荧光比色法检测caspase3活性
• 2.11 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 棘豆生物碱部位含药血清对HepG2细胞增殖的影响
• 3.2 棘豆生物碱部位含药血清对HepG2细胞周期的影响
• 3.3 棘豆生物碱部位含药血清对HepG2细胞凋亡的影响
• 3.4 棘豆生物碱部位药物血清对caspase3活性的影响
• 3.5 Ac-DEVID-CHO对人肝癌HepG2细胞凋亡过程中caspase3活性的影响
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 英文缩略词表
• 致谢