论文题目: 烧伤脓毒症骨骼肌蛋白高降解的胰岛素强化治疗
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 申传安
导师: 柴家科
关键词: 烫伤,脓毒症,蛋白降解,骨骼肌,胰岛素,胰岛素抵抗,泛素,蛋白酶体,糖皮质激素,肿瘤坏死因子,细胞培养,高效液相色谱分析,印迹法,免疫组织化学,放射免疫
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 烧伤脓毒症是重症烧伤常见而严重的并发症之一,其来势凶猛,病程进展快,常并发MODS,若得不到及时有效的防治,病死率较高。负氮平衡是烧伤脓毒症的代谢特征,是影响病情转归的重要因素之一。随着上世纪八十年代初细胞内选择性蛋白降解信号途径—泛素-蛋白酶体途径的发现,人们对脓毒症时负氮平衡展开了广泛而深入的探讨,研究认为约占人体细胞总干重40%强的骨骼肌蛋白降解增强是机体负氮平衡的主要原因,但目前烧伤脓毒症时骨骼肌蛋白高分解代谢尚缺乏有效的防治措施。 研究目的 烧伤脓毒症时骨骼肌蛋白降解具有“自噬性”特点,单纯通过补充蛋白质或氨基酸并不能有效抑制骨骼肌蛋白高降解。胰岛素是体内主要的合成激素,是肌氮平衡的重要调节者。烧伤脓毒症时糖皮质激素和炎性介质分泌增多等因素可导致胰岛素的生物效应降低,但烧伤脓毒症时胰岛素低抗与骨骼肌蛋白高降解之间的关系及其机制尚有待阐明。本课题试图通过随机、对照、前瞻性研究,经在体动物模型和离体细胞培养,分析胰岛素强化治疗对烧伤脓毒症骨骼肌蛋白高分解代谢的影响及其作用机制,以期为建立有效的临床防治措施提供理论依据。 材料和方法 1 动物实验 (1) 30只雄性大耳白兔随机分为烫伤组、烫伤治疗组、烫伤脓毒症组、烫伤脓毒症治疗组以及对照组。烫伤组使用沸水致兔背部皮肤Ⅲ度烫伤,烫伤面积约占体表总面积(TBSA)的30%;烫伤后立即腹腔注射内毒素2mg/kg·bw模拟烫伤后脓毒症模型。颈静脉置管监测血糖,烫伤治疗组和烫伤脓毒症治疗组均以静脉泵入胰岛素控制血糖在4.4～6.1mmol/L之间。伤后12小时,麻醉并处死动物,留取血、尿及肌肉组织标本。 (2) 测定血浆内皮质醇、肿瘤坏死因子(TNF-a)、乳酸以及胰岛素浓度。 (3) 测定骨骼肌内三甲基组氨酸(3-MH)含量以及尿3-MH排出量。 (4) 测定骨骼肌组织泛素系统相关成分基因转录和蛋白表达水平。 2 细胞培养实验 (1) 建立稳定的兔骨骼肌细胞离体培养增殖、融合方法,使用L[3,5-~3H]-酪氨酸标记肌管蛋白合成。
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英文摘要
第一部分 烧伤脓毒症骨骼肌蛋白高分解代谢的胰岛素强化治疗
材料和方法
一．主要实验仪器
二．主要试剂及配制
三．实验动物模型及分组
四．胰岛素强化治疗
五．样品采集及初步处理
六．指标检测及方法
1．血浆内皮质醇及炎性介质测定
2．骨骼肌内3-MH含量测定
3．尿内3-MH含量测定
4．骨骼肌组织泛素系统基因表达分析
5．蛋白印迹分析骨骼肌组织泛素系统相关蛋白的表达
6．免疫组织化学法分析骨骼肌组织泛素蛋白的表达
七．统计学处理
结果
一．血浆内炎性介质变化
二．血浆肉乳酸含量变化
三．血浆内皮质醇含量变化
四．血糖水平及血浆内胰岛素含量变化
五．骨骼肌蛋白降解率变化
1．尿内3-MH排出量变化
2．骨骼肌3-MH含量变化
六．骨骼肌泛素蛋白酶体途径的基因与蛋白表达变化
1．泛素基因表达变化
2．泛素蛋白表达变化
3．E_2-14k基因表达变化
4．E_3α基因表达变化
5．C_2亚基基因和蛋白表达变化
6．C_8基基因和蛋白表达变化
讨论
小结
参考文献
第二部分 胰岛素对骨骼肌细胞蛋白降解代谢的调节机制
材料和方法
一．主要实验仪器与耗材
二．主要试剂及配制
三．骨骼肌肌管离体培养
1．卫星细胞的分离与培养
2．卫星细胞融合形成肌管
3．卫星细胞及肌管的鉴定
四．同位素标记肌管内长寿命蛋白
五．实验分组
六．标本收集及指标检测
七．统计学处理
结果
一．胰岛素对骨骼肌细胞蛋白降解的调节
二．胰岛素对骨骼肌肌管内泛素-蛋白酶体途径的调节
1．泛素基因表达变化
2．E_2-14k基因表达变化
3．E_3α基因表达变化
4．C_2亚基基因和蛋白表达变化
5．C_8亚基基因和蛋白表达变化
讨论
小结
参考文献
综述
在读期间撰写论文及获得奖励
致谢
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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