论文摘要
雌激素受体ER是核受体的一种，主要是调节与雌激素有关的基因转录，在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用，是乳腺癌治疗的靶标和预后的指标。ER分为ERα和ERβ两种，二者都由A、B、C、D、E和F六个结构域组成，含两个转录激活区AF1和AF2。AF1具有雌激素不依赖的转录激活功能，位于A／B区；AF2具有雌激素依赖的转录激活功能，位于E／F区。AF1和AF2的有效转录激活作用依赖于与其它蛋白质的相互作用。参与调节ER转录活性的蛋白质的发现和功能研究对于有效开发治疗乳腺癌的药物具有重大意义。ERIP1是一个未知蛋白，目前还未见其相关研究的报道。本文是在酵母双杂交的基础上对ERIP1的初步研究，旨在确定ERIP1与ER之间的相互作用关系，以及ERIP1对ER下游报告基因活性的影响，从而对ERIP1的生物学功能作一初步探索。本研究利用PCR方法成功地从乳腺cDNA文库中调取了ERIP1基因，将其构建到试验所需的原核、真核表达载体中，这些重组质粒在相应的原核、真核细胞中都得到了正确的表达；通过GST pull-down实验证明，ERIP1在体外可以和ER结合，与ERα结合的是ERIP1的a、b、c片段，其中b片段的结合能力最强，其强度要超过全长，与ERβ结合的是ERIP1的b、c片段；细胞内免疫共沉淀实验证明，ERIP1在体内可以以激素不依赖的方式与ERβ相互作用，ERIP1四个片段均可以与ER结合，其中ERIP1的b片段与ERα的结合能力最强。综合三个用于验证蛋白与蛋白相互作用实验的结果可以得出结论：ERIP1与ER之间确实存在相互作用。为了探讨ERIP1的生物学功能，我们进行了一系列的活性实验。利用ERE-luc、pS2-luc、C3-luc、CatD-luc发现，ERIP1对ER下游报告基因的影响有所区别，ERIP1对ERE-luc、pS2-luc的影响趋势相同，并且能升高ERα的转录活性，降低ERβ的转录活性。由于在乳腺癌中，ERα与ERβ的作用正好相反，说明ERIP1与两种ER结合后所表现出的作用是促进癌症的发生与发展。ERIP1与ER共转对C3-luc活性无影响。ERIP1与ER可以协同升高CatD-luc的活性，单转时也可以升高CatD-luc的活性，通过自身转录活性证明ERIP1不是一个转录因子，它不仅可以作为ER的共调节因子来影响CatD-luc的活性，同时也有可能与其它某些因子相互作用，通过另一种通路改变CatD-luc的活性，并且具有剂量依赖效应。在免疫组织化学实验中，将带有GFP标签的ERIP1转染入HEK-293T和MCF-7细胞，发现细胞大面积死亡，细胞中转染入质粒后，细胞核皱缩、破碎，说明ERIP1可能诱导细胞凋亡。这些研究结果表明，ERIP1可能是ER信号通路中的一个新型共调节因子，通过与ER相互作用从而影响ER下游信号的传递，进一步的深入研究将有助于了解ER信号通路的调控机制以及ERIP1的临床治疗作用，有可能为乳腺癌的治疗提供一个新的靶标。