噪声应激对大鼠动脉血管平滑肌细胞GRP78和CHOP表达的影响及拉西地平干预的研究

论文摘要

研究背景及目的高血压是危害人类健康最为常见的慢性病,同时也是人类的主要死亡原因之一。高血压的发病除与遗传因素密切相关外,环境因素也起着十分重要的作用。流行病学资料结果显示,一定强度的应激刺激是导致高血压的重要原因。噪声是人们生活和工作环境中经常接触的外界因素,除可以引起听觉损伤之外,还能导致神经、心血管系统等功能的非特异性损伤,其中对血压的影响已经引起广泛的关注。内质网应激是由于某种原因所导致的细胞内质网稳态失衡,并引起生理功能发生紊乱的一种亚细胞器上的病理过程。目前的研究表明,内质网应激参与多种心血管疾病关系密切,包括冠心病、动脉粥样硬化等。拉西地平（1acidipine）是一种新型的二氢吡啶类钙通道阻滞剂（calcium-channel blocker,CCB）,其在平稳降压的同时可有效地保护靶器官,具有血管舒张、良好的改善内皮功能、抑制平滑肌细胞增殖、抗动脉粥样硬化的作用,并可显著降低高血压所致心脑血管并发症的发生。但是拉西地平是否在噪声应激条件下具有心血管保护作用,目前尚不十分清楚。血管系统在高血压的发生发展中直接参与高血压的始动和维持机制,同时又是高血压时受累的主要靶器官,大多数心脑血管并发症均是血管病变的直接或间接后果。本课题通过建立噪声应激大鼠模型,观察大鼠血压和动脉血管平滑肌细胞内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达的变化,研究动脉血管中层厚度的变化,并初步探讨钙通道阻滞剂对噪声应激大鼠动脉血管平滑肌细胞内质网应激的影响。旨在为噪声应激所致动脉血管平滑肌细胞损害的发生机制提供理论依据,同时对其防治提供新的靶点。研究方法本研究以大鼠为实验对象,通过噪声应激环境建立噪声应激大鼠模型。采用颈动脉插管、免疫组化染色、蛋白免疫印记法（Western-blot）等实验技术和方法,观察:（1）噪声应激后大鼠血压的变化;（2）噪声应激后动脉血管平滑肌细胞GRP78和CHOP表达的变化;（3）噪声应激后动脉血管中层厚度的变化;（4）拉西地平对噪声应激大鼠动脉血管平滑肌细胞GRP78、CHOP表达和动脉血管中层厚度的影响。研究结果（1）除2w亚组外,对照组4w、6w、8w各亚组平均动脉压（MAP）（分别为123.79±8.86mmHg、125.53±9.87mmHg、123.60±9.36mmHg）,均低于相应噪声组（166.90±8.32 mmHg、174.23±8.57mmHg、178.56±9.03mmHg）,并有非常显著性差异（P<0.01）,且随着应激时间的延长,血压呈递增趋势;（2）除2w亚组外,噪声组4w、6w、8w亚组GRP78表达（OD值分别为0.65±0.03、0.88±0.04、0.63±0.03）均高于相应对照组（OD值分别为0.47±0.02、0.47±0.03、0.46±0.03）,并有非常显著性差异（P<0.01）。噪声组GRP78的表达,6w亚组达到最高值,8w亚组减弱,但仍高于2w亚组;（3）噪声组4w、6w、8w亚组GRP78表达含量分别为0.42±0.03、0.79±0.03、0.45±0.01,均高于相应对照组（分别为0.27±0.02、0.28±0.03、0.29±0.03）,并有非常显著性差异（P<0.01）;（4）噪声组4w、6w、8w亚组CHOP表达（OD值分别为0.45±0.05、0.56±0.04、0.67±0.03）高于相应对照组（OD值分别为、0.37±0.02、0.39±0.03、0.38±0.02）,并有非常显著性差异（P<0.01）。噪声组CHOP的表达随着应激时间的延长逐渐增加,8w达到最高值。（5）噪声组4w、6w、8w亚组CHOP表达含量分别为0.41±0.03、0.58±0.03、0.71±0.03,均高于相应对照组（分别为0.13±0.01、0.12±0.02、0.14±0.02）,并有非常显著性差异（P<0.01）;（6）噪声组2w、4w亚组血管中层厚度（分别为93.45±4.42μm、95.49±4.06μm）大于相应对照组（ 92.91±4.03μm、93.22±3.89μm）,但组间比较均无统计学意义（P>0.05）;噪声组6w、8w（105.89±4.36μm、110.46±5.11μm）亚组与相应对照组（93.19±4.32μm、92.67±3.77μm）血管中层厚度组间比较均有显著性差异（P<0.05）;噪声组4w、6w、8w各亚组组间比较均有非常显著性差异（P<0.01）;（7）对照组、噪声组及拉西地平+噪声组的MAP分别为118.65±9.84mmHg、174.23±6.26mmHg、139.23±8.14mmHg,拉西地平+噪声组的MAP低于噪声组,高于对照组。对照组与拉西地平+噪声组比较有统计学意义（P<0.05）;噪声组与拉西地平+噪声组比较非常显著性差异（P<0.01）;（8）对照组、噪声组、拉西地平+噪声组OD值分别为0.46±0.03、0.87±0.04、0.74±0.04,拉西地平+噪声组OD值高于对照组,低于噪声组,组间比较有非常显著性差异（P<0.01）;（9）对照组、噪声组及拉西地平+噪声组OD值分别为0.37±0.02、0.57±0.04、0.49±0.03,拉西地平+噪声组OD值低于噪声组,高于对照组,组间比较有非常显著性差异（P<0.01）;（10）对照组、噪声组及拉西地平+噪声组血管中膜厚度分别为93.13±4.12μm、105.89±4.36μm、94.56±3.97μm。噪声组主动脉中层厚度显著增厚,与对照组比有非常显著性差异（P<0.01）,拉西地平+噪声组血管中层厚度略高于对照组,但无统计学意义（P>0.05）。研究结论（1）噪声应激后随着应激时间的延长,大鼠MAP逐渐增加,并呈递增趋势,提示噪声应激可以引起血压的升高;（2）噪声应激后血管平滑肌细胞GRP78及CHOP表达均增强,提示噪声应激可以引起动脉血管平滑肌细胞内的内质网应激;（3）噪声应激后血管中层厚度增加,提示噪声应激可以引起血管重构;（4）CCB可以降低噪声应激大鼠血管平滑肌细胞GRP78及CHOP表达水平,抑制大鼠血压增高,同时可以防治中层厚度增加,提示CCB通过减弱内质网应激强度,改善血管重构。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 1 应激与心血管疾病
• 2 内质网应激的病理生理作用
• 3 CCB 与高血压
• 研究一 噪声应激对大鼠动脉血管平滑肌细胞GRP78 和CHOP 表达的影响及其与高血压和血管重构的关系
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 研究二 拉西地平对噪声应激大鼠动脉血管平滑肌细胞GRP78、CHOP表达及血管重构的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢