海产动物来源n-3PUFA磷脂的提取及生物活性研究

论文摘要

目前我国水产品产量已占世界总产量的三分之一左右,位居世界第一位,但加工和综合利用方面与世界水平相比差距还十分明显。近年来,我国水产加工业的产业结构正逐步发生变化,由过去的初步加工、粗加工向精深加工方向发展,且追求多样化、系列化和高附加值的产品。太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）产量每年居于我国养殖贝类前列,却尚无好的精深加工利用方式;加工后得到的虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis）生殖腺、鸢乌贼（ Sthenoteuthis oualaniensis ）卵和阿拉斯加狭鳕（ Theragra chatcogramma）鱼卵目前也得不到充分的综合利用。如何充分挖掘这类海产动物原料的价值,提高其综合利用率,得到高附加值,高科技含量的产品,一直是亟待解决的问题。海产动物中富含EPA（二十碳五烯酸）、DHA（二十二碳六烯酸）等n-3系列不饱和脂肪酸（n-3 PUFA）,贝类和鱼卵又是含丰富磷脂的原料,因而从上述海产动物原料中开发n-3 PUFA磷脂是一个很值得研究的方向。首先本文以太平洋牡蛎、虾夷扇贝生殖腺、鸢乌贼卵和阿拉斯加狭鳕鱼卵等海产动物原料为研究对象,提取其中的总脂肪,分析其中的脂质组成和总胆固醇含量,检测各脂质中的脂肪酸组成,并建立了对于海产动物来源磷脂的灵敏、精确的HPLC-ELSD检测分析方法。发现鸢乌贼卵、鳕鱼卵磷脂中含大量PC,论证了以两者为原料,大量获取以DHA-PC、EPA-PC为主要功能成分的DHA/EPA磷脂的提取工艺的可行性。其次,采用鸢卵粉为原料,用超临界CO2萃取工艺对其中胆固醇进行脱除后用乙醇浸提,并将工艺进行了优化和放大实验,最后得到的提取工艺提取效果好,得到的磷脂产物产量高,纯度好,胆固醇含量低,而且整个工艺过程无任何有毒有害的溶剂残留或污染,绿色环保,有着较高的生产应用价值。对得到的DHA磷脂产物分析,发现其磷脂含量达85%以上,PC含量达60%以上,脂肪酸组成中DHA含量达30%以上。再次,对DHA磷脂产物中的PC的脂肪酸组成情况进行了分析,发现DHA含量达40%,证明其中富含DHA-PC;利用磷脂酶A1对DHA-PC进行酶法降解得到2-DHA-LPC产物,其脂肪酸组成中DHA含量达50%,证明DHA-PC中的DHA以结合在Sn-2上为主,即以2-DHA-PC为主。最后,将DHA磷脂产物制成脂质体,采用灌胃荷S180肉瘤小鼠的方法研究了其抗肿瘤活性及对免疫功能的调节作用。实验结果表明DHA磷脂脂质体具有抑制肿瘤生长的作用,而且能全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能。推测其通过增强T细胞、B细胞和巨噬细胞等的功能以抑制肿瘤细胞的生长。分析认为DHA磷脂脂质体提高机体的免疫能力和其抗肿瘤作用主要是通过PC和DHA两种活性物质来实现的,并且克服了DHA单独存在时易被氧化的缺点,制备成脂质体的形式显现更好的生理活性。2-DHA-PC为主要功能成分的DHA磷脂具有广阔的医药和保健品的开发前景。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 0.1 海产动物来源脂质研究现状
• 0.2 磷脂概述
• 0.2.1 磷脂的研究历史
• 0.2.2 磷脂的结构和分类
• 0.2.3 理化性质
• 0.3 磷脂的来源及生理功能
• 0.3.1 磷脂的来源
• 0.3.2 磷脂的生理功能
• 0.3.3 DHA/EPA 磷脂的生理功能
• 0.4 磷脂的应用和发展现状
• 0.4.1 磷脂的应用
• 0.4.2 磷脂生产发展现状
• 0.5 磷脂组分的分析检测方法研究进展
• 0.5.1 TLC 法
• 0.5.2 HPLC 法
• 0.5.3 其它方法
• 0.6 磷脂分离提取研究进展
• 0.6.1 溶剂萃取法
• 0.6.2 超临界流体萃取法
• 0.6.3 吸附色谱法
• 0.6.4 膜分离法
• 0.7 本论文立题依据和研究内容
• 第一章 几种海产动物原料中脂质含量及其脂肪酸组成分析
• 引言
• 1. 试验材料与仪器
• 1.1 化学试剂与材料
• 1.2 主要设备仪器
• 2 试验方法
• 2.1 原料预处理
• 2.2 水分含量测定
• 2.3 总脂肪含量测定
• 2.4 胆固醇含量测定
• 2.5 总脂肪组分分离测定
• 2.6 脂肪酸组成分析
• 3 结果与讨论
• 3.1 水分含量测定
• 3.2 脂肪含量及组成
• 3.3 脂肪酸组成分析结果
• 本章小结
• 第二章 几种海产动物原料中磷脂组成的 HPLC-ELSD 分析
• 引言
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 化学试剂与材料
• 1.2 主要设备仪器
• 2 试验方法
• 2.1 HPLC-ELSD 分析条件选择
• 2.2 样品配制
• 2.3 进样分析
• 3 结果与讨论
• 3.1 磷脂标准曲线
• 3.2 磷脂标准混合与磷脂样品的色谱图
• 3.3 HPLC-ELSD 分析精密度
• 3.4 海产动物来源磷脂样品分析
• 本章小结
• 第三章 DHA 磷脂产品制备工艺研究
• 第一节 原料选择
• 引言
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 试剂与材料
• 1.2 仪器
• 2 试验方法
• 2.1 卵粉制备
• 2.2 总脂肪含量测定
• 2.3 总脂肪组分分离测定
• 2.4 脂肪酸组成分析
• 2.5 磷脂组成分析
• 3 结果与讨论
• 3.1 脂肪含量及组成
• 3.3 磷脂组成分析
• 3.4 原料选择
• 第二节 乙醇浸提鸢卵粉工艺研究
• 引言
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 试剂与材料
• 1.2 仪器
• 2 试验方法
• 2.1 鸢卵粉乙醇浸提工艺优化
• 2.2 总胆固醇含量测定
• 2.3 脂肪酸组成测定
• 3 结果与讨论
• 3.1 鸢卵粉乙醇浸提工艺优化结果
• 3.2 总胆固醇含量测定结果
• 3.3 脂肪酸组成测定结果
• 2法脱除鸢卵粉胆固醇工艺优化'>第三节 超临界 CO₂法脱除鸢卵粉胆固醇工艺优化
• 引言
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 试剂与材料
• 1.2 仪器
• 2 试验方法
• 2.1 鸢卵粉总脂肪提取
• 2.2 鸢卵粉总胆固醇含量测定
• 2萃取技术脱除鸢卵粉胆固醇的工艺研究'>2.3 超临界 CO₂萃取技术脱除鸢卵粉胆固醇的工艺研究
• 2.4 脱胆固醇鸢卵粉制备 DHA 磷脂产物分析
• 3 结果与讨论
• 2萃取技术脱除鸢卵粉胆固醇的工艺研究结果'>3.1 超临界 CO₂萃取技术脱除鸢卵粉胆固醇的工艺研究结果
• 3.2 脱胆固醇鸢卵粉制备 DHA 磷脂产物分析结果
• 本章小结
• 第四章 DHA 产物中 PC 的脂肪酸组成特点
• 第一节 DHA 磷脂产物中 PC 的脂肪酸组成分析
• 引言
• 1. 试验材料与仪器
• 1.1 化学试剂与材料
• 1.2 主要设备仪器
• 2 试验方法
• 2.1 PC 分离
• 2.2 脂肪酸组成分析
• 3 结果与讨论
• 3.1 TLC 分离PC 效果
• 3.2 PC 脂肪酸组成分析
• 第二节 DHA-PC Sn-2 位脂肪酸组成分析
• 引言
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 试剂与材料
• 1.2 仪器
• 2 试验方法
• 2.1 酶解液中总脂肪提取
• 2.2 LPC 分离
• 2.3 脂肪酸组成分析
• 3 结果与讨论
• 本章小结
• 第五章 DHA 磷脂的抗肿瘤及免疫调节作用研究
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 对荷瘤小鼠S180 肉瘤生长、和胸腺指数的影响
• 2.2 对体重和免疫器官重量的影响
• 2.3 对荷瘤小鼠血清溶血素含量的影响
• 2.4 对荷瘤小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响
• 2.5 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
• 3 结论
• 本章小结
• 创新
• 参考文献
• 附录
• 发表论文情况
• 致谢