醒脑静注射液对MRL/lpr狼疮模型小鼠继发狼疮脑病的影响及相关机制研究

论文摘要

目的：考察醒脑静注射液是否可以用于治疗脑血管缺血引起的狼疮脑病（CNS-SLE）,并分析其作用机制。方法：将SLE模型小鼠分为模型组、醒脑静注射液治疗组、强的松联合环磷酰胺治疗组（醒脑静注射液3ml/d,强的松1mg/kg.d联合环磷酰胺2mg/kg.d,腹注给药2周,间隙2周）；药物干预4个月后采用MRI进行头颅扫描,分析大脑、小脑半球深部白质、基底节区及脑干异常及脑脊液水平,采用跳台法进行CNS-SLE小鼠学习记忆行为测定；药物干预中期（2个月）及末期（4个月）采集小鼠血清,应用酶联免疫吸附试验检测血清细胞因子TNF-α、IFN-γ;药物干预4个月后,处死小鼠,取CNS-SLE小鼠脑组织进行病理分析、免疫组化分析VCAM1、Fas/FasL蛋白表达,P38蛋白表达及磷酸化水平,采用Real time RT-PCR （SYBR染料法）检测脑组织血管细胞黏附分子-1 （VCAM-1） mRNA表达水平。结果：药物干预4个月后中药、西药治疗组相对于模型组四肢明显红斑的症状减轻；根据MRI图谱分析发现模型组脑部存异常信号灶及出血,中药和西药治疗组症状减缓,脑脊液含量在三组无明显差异；老鼠的学习能力三组之间反应时间、错误次数无显著性差异（P>0.05）,记忆保持能力治疗组跳下平台的潜伏期与模型组比较明显增长（P<0.05）,错误次数无显著性差异（P>0.05）；小鼠血清IFN-γ、TNF-α水平在同时期无显著性差异（P>0.05）,但模型组和西药组末期血清IFN-y水平显著低于中期（P<0.05）。病理图像显示模型组脑组织中大量炎性因子、出血点存在,有水肿现象,神经元细胞增生一般；中药和西药治疗组这类病理特征大大减轻或消失,神经元细胞则增生活跃；免疫组化结果显示VCAM-1和磷酸化P38在中药和西药治疗组脑组织中的表达水平显著低于模型组（P<0.05）; FAS、FASL、P38在三组脑组织中的表达水平无显著性差异（P>0.05）；三组小鼠脑组织VCAM-1 mRNA表达水平中模型组和中药组无显著性差异,而模型组与西药组有差异。结论：醒脑静干预有效改善了SLE模型型小鼠脑部出血、炎症、水肿等症状,增强了小鼠的记忆能力；机制研究结果提示醒脑静干预治疗可降低小鼠IFN-γ分泌表达,抑制脑组织中VCAM-1和磷酸化P38蛋白表达水平,从而影响SLE模型小鼠继发狼疮脑病的进程。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 理论研究
• 一、系统性红斑狼疮及狼疮脑病
• 二、醒脑静注射液药理及临床应用
• 第二部分 实验研究
• 1、动物饲养、分组及给药
• 1.1 CNS-SLE小鼠动物模型
• 1.2 实验用药
• 1.3 实验分组
• 1.4 给药方式
• 2、CNS-SLE模型小鼠MRI表现
• 2.1 MRI扫描
• 3、CNS-SLE模型小鼠学习记忆行为测定（跳台法）
• 3.1 实验过程
• 3.2 统计学方法
• 4、CNS-SLE模型小鼠血清细胞因子检测
• 4.1 采血
• 4.2 ELISA检测血清TNF-α、IFN-α
• 4.3 统计学方法
• 5、CNS-SLE模型小鼠脑组织病理分析
• 5.1 主要试剂
• 5.2 主要仪器
• 5.3 病理检测
• 6、CNS-SLE模型小鼠脑组织免疫组化分析
• 6.1 主要试剂
• 6.2 主要仪器
• 6.3、检测
• 6.4 统计学方法
• 7、CNS-SLE模型小鼠脑组织VCAM-1mRNA表达水平分析
• 7.1 主要试剂
• 7.2 主要仪器
• 7.3 方法
• 第三部分 结果
• 1、CNS-SLE模型小鼠饲养4个月后外观
• 2、CNS-SLE模型小鼠MRI分析结果
• 3、CNS-SLE模型小鼠跳台实验结果
• 4、CNS-SLE模型小鼠血清细胞因子检测结果
• 5、CNS-SLE模型小鼠脑组织病理分析结果
• 6、CNS-SLE模型小鼠脑组织免疫组化分析结果
• 7、CNS-SLE模型小鼠脑组织VCAM-1 mRNA表达分析结果
• 7.1 PCR反应特异性
• 7.2 PCR反应相关性（见图19、20）
• 7.3 PCR反应结果
• 第四部分 讨论
• 存在的主要问题及今后的设想
• 参考文献
• 附录
• 致谢