论文摘要
4.1B／DAL-1是蛋白4.1家族的成员，这个家族的蛋白在连接跨膜蛋白和肌动蛋白细胞骨架方面发挥着重要作用，这个家族由4个成员组成，包括最先发现的4.1R（来源于红细胞）和最近克隆的同源蛋白4.1N、4.1G以及4.1B／DAL-1。4.1B／DAL-1基因定位在人染色体18p11.3区域，有研究证明60％的非小细胞肺癌中存在4.1B／DAL-1的表达缺失，而且在4.1B／DAL-1缺失的肺癌细胞株中重新表达4.1B／DAL-1，能够显著抑制肿瘤细胞的生长。目前，已经证明肺癌，乳腺癌，脑膜瘤中都存在4.1B／DAL-1的表达缺失和染色体18p11.3区域的杂合缺失。食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，近年来尽管发现了一些抑癌基因和癌基因与食管癌的发生相关，但其详尽的分子机制和遗传变化还远未清楚。研究4.1B／DAL-1在食管癌中的表达情况，对于发现新的抑癌基因、探索食管癌的发病机制具有重要的意义。方法采用免疫组化法检测110例食管鳞癌和癌旁组织中4.1B／DAL-1蛋白的表达情况。以组织中血管的管壁作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。选择定位于染色体18p11.3区域附近的4个微卫星D18S481、D18S52、D18S391和D18S62进行杂合缺失（LOH）分析。从石蜡切片中提取DNA，采用微卫星引物进行PCR扩增，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染，照相。从新鲜组织中提取DNA，经亚硫酸氢盐修饰。采用甲基化引物（M）和非甲基化引物（U）鉴别CpG岛的甲基化状态。甲基化引物（M）识别CpG位点发生甲基化的序列，非甲基化引物（U）识别CpG位点未发生甲基化的序列。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像仪照相。结果食管鳞癌组织中4.1B／DAL-1的缺失率为39.1％（43／110），癌旁正常组织的缺失率为5.1％（6／110），两组缺失率的差异有统计学意义（χ2=35.945，P＜0.01）；食管鳞癌高、中、低分化组的缺失率分别为25.6％（10／39）、38.2％（13／34）、54.1％（20／37），三组缺失率的差异有统计学意义（χ2=6.453，P＜0.05）29例食管鳞癌组织中，23例在D18S481、D18S52、D18S391和D18S62四个微卫星位点均没有发生LOH。3例在D18S481位点发生LOH，2例在D18S52位点发生LOH，1例在D18S391位点发生LOH。29个病例中共有6例在染色体18p11.3区域发生了LOH，杂合缺失率为20.7％（6／29）。观察发生LOH的6个病例的免疫组化结果，发现6个病例均有4.1B／DAL-1的表达。所有33例癌旁组织中都没有发现4.1B／DAL-1基因5’端启动子区域的CpG岛的甲基化。33例食管鳞癌标本中有9例完全甲基化，14例部分甲基化，10例没有甲基化，甲基化的发生率为69.7％（23／33）。与免疫组化结果相联系，在发生甲基化（包括完全甲基化和部分甲基化）的23例食管鳞癌标本中，有14例发现了4.1B／DAL-1的表达缺失，缺失率为60.9％（14／23），而未发生甲基化的10例食管鳞癌标本均有4.1B／DAL-1的表达。结论食管鳞癌中存在着一定比例的4.1B／DAL-1蛋白的表达缺失，4.1B／DAL-1在食管鳞状上皮分化调控过程中发挥着重要作用，4.1B／DAL-1的表达异常可能导致细胞无法进入正常的分化过程，最终无限制分裂，发生肿瘤。食管鳞癌的染色体18p11.3区域存在少量的杂合缺失现象，但是杂合缺失不是4.1B／DAL-1基因沉默的主要机制。4.1B／DAL-1基因启动子区域CpG岛的甲基化很可能是该基因转录失败的重要原因，甲基化的CpG岛可能无法正常的转录复合体，导致转录失败。