论文摘要
目的探讨小儿肾母细胞瘤组织中TAM浸润及VEGF-C表达与临床病理学参数、微血管及淋巴管生成的关系,寻找影响患者预后的因素,为肿瘤的抗微血管和淋巴管生成的基因治疗提供依据。方法按我们制定的标准搜集郑州大学第一附属医院2004年7月-2010年1月的46例肾母细胞瘤患儿的石蜡包埋标本。其中男性20例,女性26例,年龄8月-13岁,中位年龄35.5月,根据美国Wilms瘤研究组临床分期标准：Ⅰ～Ⅱ期29例,Ⅲ～V期17例。病理分型：预后良好型38例,预后不良型8例。淋巴结转移者13例,血管浸润者12例。另外,从上述46例中选择19例瘤旁组织（距瘤体边缘≥3cm）和8例正常肾组织标本作为参照。查证并记录46例入选病例的一般情况、诊断、手术处理情况、临床分期、病理分型及分化、术前/后化疗情况等,通过患者门诊复查结合电话随访收集相关预后资料。采用免疫组织化学方法测定正常肾组织、瘤旁组织和肾母细胞瘤组织中的CD68、VEGF-C、CD34和LYVE-1的表达情况,并进行TAM计数、微血管密度（MVD）和淋巴管密度（LVD）计数。采用单因素分析TAM计数、VEGF-C表达、MVD和LVD与小儿肾母细胞瘤临床病理特征的关系；采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验评价TAM计数、VEGF-C表达、MVD和LVD与患者预后的关系,并用Cox比例风险模型进行多因素分析。结果1 CD68阳性蛋白的表达与TAM计数CD68阳性蛋白表达于TAM的细胞浆中,呈清晰的棕黄色颗粒状。在正常肾组织、瘤旁组织和肾母细胞瘤组织中的计数分别为9.38±4.10个/HP、18.05±5.85个/HP和33.13±8.71个/HP。三种组织中的TAM计数有显著性差异。2 VEGF-C阳性蛋白分布与表达VEGF-C阳性蛋白表达于细胞胞质和间质中,呈现清晰的棕黄色颗粒。按照分级标准,在正常肾组织、瘤旁组织和肾母细胞瘤组织中的VEGF-C高表达率分别为12.50%、68.42%和73.91%。VEGF-C在三种组织中的高表达率有显著性差异。3 CD34、LYVE-1蛋白的表达及MVD和LVD计数CD34阳性蛋白选择性地显示肿瘤内的血管内皮细胞,呈棕褐色,在正常肾组织、瘤旁组织和肾母细胞瘤组织中MVD的平均值分别为8.25±2.82个/HP,14.63±3.92个/HP和16.98±3.74个/HP。三种组织中的MVD有显著性差异。LYVE-1阳性蛋白特异性标记淋巴管也呈棕褐色管状结构。三种组织中LVD平均值分别为2.75±1.58个/HP、5.26±2.26个/HP和4.72±1.88个/HP,三种组织中的LVD差异有统计学意义。4 TAM高密度、VEGF-C高表达、MVD和LVD与临床病理特征之间的关系单因素分析显示TAM高密度与肾母细胞瘤的临床分期和有无淋巴结转移有关、而与患者的性别、年龄和肿瘤大小无关；VEGF-C高表达与肿瘤的临床分期、有无淋巴结转移和有无血管浸润有关,而与患者的性别、年龄和肿瘤大小无关；MVD和LVD与肾母细胞瘤临床分期、是否有血管浸润和有无淋巴结转移有关,与患者的性别、年龄无关。另外,MVD还与肿瘤的大小有关。5 TAM计数、VEGF-C表达与MVD和LVD的相关关系经Person和Spearman等级相关（与VEGF-C相关的指标）分析,TAM计数与LVD和MVD有正相关关系（r=0.395,P=0.006；r=0.308,P=0.024）,VEGF-C的表达与LVD和MVD有正相关关系（r=0.495,P=0.006；r=0.308,P=0.024）。同样VEGF-C和TAM计数之间也存在正相关（r=0.603,P=0.012）。6 TAM计数、VEGF-C表达、MVD和LVD与患儿生存的关系Kaplan-Meier法和Log-rank检验评价各参数与患儿的生存情况的关系。以TAM计数的平均值为界,≥33的中位生存时间为29个月,显著低于<33者（40.5个月,χ2=8.570,P=0.003）；VEGF-C高表达患儿的中位生存时间为31个月,低于低表达者（41个月,χ2=4.113,P=0.043）；以肿瘤组织MVD的平均值为界,≥17的中位生存时间为33个月,显著低于<17者（39个月,χ2=4.321,P=0.038）；以肿瘤组织LVD的平均值为界,≥5的中位生存时间为32个月,低于<5者（41个月,χ2=4.588,P=0.032）。7 Cox多因素分析结果以患儿性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分型、淋巴结转移、血管浸润,化疗程数、TAM计数、VEGF-C表达、MVD和LVD等为变量,采用向前引入法行Cox多因素分析显示,淋巴结转移和VEGF-C高表达是影响患者生存的独立危险因素,化疗程数是影响患者生存的独立保护因素,而性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分型、MVD和LVD均不是影响生存率的独立因素。结论1.肾母细胞瘤组织中TAM浸润密度与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分型和有无血管浸润无关,而与肿瘤的临床分期和有无淋巴结转移有关；2.肾母细胞瘤组织中VEGF-C蛋白高表达,与患者性别、年龄、肿瘤大小和病理分型无关,而与肿瘤的临床分期、有无淋巴结转移和有无血管浸润均有关；3.肾母细胞瘤组织中TAM高密度浸润和VEGF-C蛋白高表达对肿瘤组织微血管和淋巴管新生有促进作用,特别是在肿瘤细胞淋巴道转移中可能具有协同作用；4.TAM高密度浸润和淋巴结转移是影响肾母细胞瘤患者生存的独立危险因素,化疗程数是影响其生存的独立保护因素,而性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分型、MVD和LVD均不是影响生存率的独立因素。
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