论文摘要
【目的】动脉粥样硬化（artherosclerosis，AS）目前被认为是一种炎症和免疫性疾病。树突状细胞（dendritic cells，DCs）是体内最强的专职抗原递呈细胞（antigen presenting cells，APCs），树突状细胞特异性细胞间黏附分子—3捕获的非整合蛋白（DC-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin，DC-SIGN）是DC表面一种新型的凝集素受体。吡格列酮（Pioglitazone，Pio）是新一代的噻唑烷二酮类（thiazolidinediones，TZD）胰岛素增敏剂，最近发现对AS有一定的作用。我们通过研究Pio对DC表面DC-SIGN表达的影响，探讨Pio调节DC粘附和迁移功能拮抗动脉粥样硬化形成的可能机制。【方法】1、各种细胞的分离和培养：（1）用淋巴细胞分离液从健康成人外周血白细胞悬液分离单个核细胞，再用CD14+磁珠分选出纯度大于98％的CD14+单核细胞，用含20 ng/ml rhGM-CSF（recombinant human granulocyte maerophage-colony stimulating factor）、10 ng／ml rhIL-4（recombinant human interleukin-4）、10％胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的RPMI1640培养基培养，第5天收集悬浮细胞作为未成熟DC。（2）用0.1％Ⅰ型胶原酶从健康产妇剖宫产脐带消化获得人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），用含15％FBS，10 ng／ml rhEGF（recombinant human epidermal growth factor）的M199培养基培养，用抗Ⅷ因子抗体鉴定呈阳性。2、细胞干预：使用不同浓度的Pio（0.1μmol／L、1.0μmol／L、10μmol／L）加或不加过氧化物酶体增殖物活化受体-γ拮抗剂GW9662（10μmol／L）干预DC24h。3、各种指标的检测：然后通过Western blot试验和免疫荧光试验检测Pio对DC表达DC-SIGN蛋白的影响，运用细胞粘附试验检测Pio对DC粘附功能的作用，运用细胞迁移试验检测Pio对DC迁移功能的作用。【结果】1、在倒置显微镜下见DC悬浮生长，聚集成簇，有大量胞质突起。2、Pio呈浓度依赖性下调DC-SIGN蛋白的表达，Pio 1.0μmol／L时就开始明显减少（P＜0.05），尤其在较高浓度Pio 10μmol／L时，DC-SIGN蛋白表达的减少更明显（P＜0.01或P＜0.001），而且此作用能被GW9662逆转（P＜0.05或P＜0.01）。3、Pio呈浓度依赖性抑制DC粘附和迁移功能，Pio 1.0μmol／L时就开始明显降低（P＜0.05），尤其在较高浓度Pio 10μmol／L时，DC的粘附和迁移降低更明显（P＜0.001或P＜0.01），而且此作用能被GW9662逆转（P＜0.001或P＜0.05），同时经抗DC-SIGN抗体作用后DC粘附和迁移较空白对照明显降低（P＜0.001或P＜0.01）。【结论】1、Pio呈浓度倚赖地下调DC表面DC-SIGN蛋白的表达，这种作用可以被PPAR-γ拮抗剂GW9662逆转。2、Pio呈浓度依赖性抑制DC的粘附和迁移，这个过程同样可以被PPAR-γ拮抗剂GW9662逆转。3、Pio通过激活PPAR-γ下调DC-SIGN蛋白的表达，抑制DC的粘附和迁移。