论文摘要
目的:利用基因工程技术,分别构建含HBV/RNAse H1及H2基因的原核表达载体pGSTag,并转化到大肠杆菌,诱导表达出目的蛋白后,用原核表达产物作为抗原,制备单克隆抗体,并对抗单克隆抗体血清型进行初步分析鉴定,为临床应用奠定基础。 方法:本研究采用摇瓶发酵,将重组质粒pGSTag/HBV/RNAseH1及H2分别转化BL21（DE3）codon plus（?）-RP、HB101、BL21（DE3）PlysS、G1727、DH5α、BL21大肠杆菌。同时用不同的培养基（LB、SOB、SOC、TB、2YT、M9）、不同的初始菌浓度（即OD为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2）、不同的诱导时间（2.0h,4.0h,6.0h）、初始pH（6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,8.5）以及不同的IPTG诱导浓度（0.1,0.3,0.6,1.0,2.0,3.0mmol/L）,分别表达重组蛋白,并将重组菌与空白菌作生长曲线对比,收集菌体,初步纯化,菌液（0.5ml）经离心洗涤后,进行SDS-PAGE分析,并用FR-200紫外可见分析装置、复日smart view 2001生物电泳图象分析系统分析pGSTag/HBV-RNAseH1及H2蛋白表达量,同时进行Westerblot印迹分析。并以
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