论文题目: 肺炎衣原体对血管内皮细胞的损伤及黄芩苷的保护作用
论文类型: 博士论文
论文专业: 中医临床基础
作者: 邝枣园
导师: 李国桥
关键词: 黄芩苷,药理,肺炎衣原体,黏附因子,可溶性黏附因子,鞘氦醇激酶,基因表达,动脉粥样硬化,样受体,血管内皮细胞,流式细胞仪技术,实时荧光
文献来源: 广州中医药大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的 动脉粥样硬化（atheroclerosis,AS）是多种心脑血管疾病的病理基础,加强对其病因、发病机制及防治的研究,对于预防多种心脑血管疾病的发生,降低心脑血管疾病的病残率和死亡率,具有非常重要的意义。AS的发生原因还不清楚,近年来愈来愈多的证据证明AS是一个慢性炎症性疾病。本世纪初有人提出了AS发生的感染学说,目前主要侧重于研究肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae简称CPN）与AS的关系。血管内皮细胞的功能障碍和受损是AS重要的病理变化。本实验的研究目的主要集中在两个方面,一是探讨CPN对血管内皮细胞损伤机制及中药对这些环节的调节;二是探讨中药的直接抗CPN增殖的作用。 方法 1.建立体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）感染肺炎衣原体细胞模型。采用姬母萨染色、荧光染色和电子显微镜证明肺炎衣原体在细胞内的寄生。 将HUVEC置于25cm2的培养瓶内,以含体积分数为15%小牛血清、2万U/L链霉素和300μg/L万古霉素、50ng/L内皮细胞添加剂的RPIM-1640培养液,经37℃、体积分数为5%CO2培养箱内培养,培养后的内皮细胞以2×108/L的浓度接种于6孔培养板继续培养;孔底放入载玻片,待长成单层后加入肺炎衣原体,培养48h后,将载波片取出进行姬姆萨染色,姬姆萨染色方法参考鄂征法; 肺炎衣原体的异硫氰酸荧光素（FITC）荧光染色:取爬有细胞的盖玻片,PBS洗2次;甲醇固定5min后洗去,经自然干燥后加入30μL肺炎衣原体单克隆荧光抗体,③37℃湿盒孵育,30min;再用PBS冲洗2次;或用伊文思蓝复染5min,吸干涂片上的水,在荧光显微镜下观察肺炎衣原体在HUVEC内形成的包涵体、始体（EB）或网状体（RB）。 CPN的电子显微镜观察:用0.25%胰酶—EDTA消化感染CPN的细胞,在4℃用
论文目录:
论文摘要
英文摘要
引言
第一部分 研究综述
一 动脉粥样硬化的发生机制
二 肺炎衣原体感染与AS
三 鞘氨醇激酶的研究进展
四 TOLL样受体的研究进展
五 黄芩苷的研究进展
六 中医对AS的认识
七 本研究的设想与意义
第二部分 实验研究
一 肺炎衣原体(CPN)的培养及感染HUVEC
1 材料与方法
2 结果
2.1 倒置显微镜下观察CPN在HUVEC内的生长
2.2 姬姆萨染色观察CPN在HUVEC内的生长
2.3 荧光标记观察CPN在HUVEC内的生长
二 黄芩苷对HUVEC增殖的影响
三 黄芩苷对CPN诱导的CD54、CD106及TNF-α、IL-8、IL-1的影响
1 材料与方法
2 结果
2.1 黄芩苷对CD54、CD106的影响
2.2 黄芩苷对TNF-α的影响
2.3 黄芩苷对可溶性CD54、IL-8的影响
2.4 IL-1的水平
四 黄芩苷对E-选择素的影响
五 黄芩苷直接抗CPN增殖作用
六 黄芩苷对TOLL样受体的影响
1.1 材料与仪器
1.2 细胞的CPN感染及细胞总RNA的提取
1.3 RT-PCR检测TLR2mRNA、TLR4mRNA的表达
1.4 TLR2蛋白的流式细胞仪检测
2 结果
2.1 感染肺炎衣原体的HUVEC TLR2mRNA和TLR4mRNA的表达
2.2 黄芩苷对肺炎衣原体诱导的TLR2蛋白表达的影响
七 CPN感染HUVEC鞘氨醇激酶mRNA的表达与时间的关系
1.1 材料与仪器
1.2 CPN感染HUVEC时间与鞘氨醇激酶mRNA表达的关系
1.3 实时荧光RT—PCR检测鞘氨醇激酶mRNA
2.结果
八 黄芩苷对鞘氨醇激酶mRNA表达的影响
九 黄芩苷预处理对鞘氨醇激酶mRNA表达的影响
第三部分 讨论
结语
今后的研究设想和展望
附图
参考文献
英文缩写
致谢
发布时间: 2005-07-22
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