刺五加苷延缓衰老作用机理研究

论文摘要

刺五加由于含有多种的天然活性成分,且无毒副作用,自古就倍受人们青睐。随着生物活性物质分离纯化技术的发展,人们目前已经开展了大量关于刺五加活性成分的分离提取和结构鉴定方面的研究,刺五加苷就是人们利用现代化手段提取从刺五加中提取的天然活性物质。本课题给成年SD大鼠连续腹腔注射D-半乳糖建立衰老动物模型后,利用不同浓度刺五加苷作用于该模型,以维生素E作为阳性对照,从机能和形态两个方面研究刺五加苷是否具有延缓衰老的作用。在得出刺五加苷具有延缓衰老作用的基础上,结合目前世界上比较公认的自由基、免疫、端粒长度、细胞凋亡衰老学说,从体内、外两个方面研究刺五加苷延缓衰老的机理。在体内,研究了刺五加苷对衰老大鼠抗氧化能力、免疫功能、p16蛋白和对衰老相关-β-半乳糖苷酶的影响;在体外,利用具有自发凋亡的胸腺细胞作为模型,观察了刺五加苷对小鼠胸腺细胞凋亡的作用。由于衰老过程涉及机体各个系统、不同结构层次,因此本研究在整体水平、组织器官水平、细胞水平以及分子水平,分别研究了刺五加苷延缓衰老的机制。本研究的研究结果有以下几方面:（1）D-半乳糖致衰老模型构建成功。模型大鼠组织中SOD、GSH-Px活性下降,iNOS活性升高,MDA、NO浓度升高,T淋巴细胞增殖功能下降,血清IL-2浓度下降,IL-6浓度和TNF-α浓度升高,组织SA-β-gal活性增强,p16蛋白表达增加。（2）刺五加苷可以改善衰老大鼠功能。刺五加苷能增加衰老大鼠的胸腺指数和脑指数,增强学习和记忆能力,升高血中HDL-C浓度,降低TG、TC、LDL-C浓度,降低血液粘滞性。高浓度刺五加苷降低TG浓度、增强学习和记忆能力、增加胸腺和脑指数的作用好于维生素E,中、低浓度刺五加苷降低LDL-C作用效果弱于维生素E,低浓度刺五加苷改善大鼠学习和记忆能力作用也弱于维生素E。（3）高浓度刺五加苷可以延缓卵巢组织形态衰老。刺五加苷作用后衰老大鼠卵泡细胞轮廓清,线粒体损伤减轻,核肿胀缓解,常染色质分布均匀,中、低浓度刺五加苷和维生素E作用后细胞器多种退行性改变仍很严重。刺五加苷可延缓神经细胞退行性改变。高浓度刺五加苷可使神经细胞轮廓清晰,核膜完整光滑,常染色质分布均匀,但其对神经细胞质水肿、线粒体嵴损伤改善仍不明显,中、低浓度刺五加苷和维生素E作用后细胞器退行性改变较严重。各浓度刺五加苷都可以抑制肝细胞退行性改变。刺五加苷可以使肝细胞轮廓清晰、线粒体形态基本完好,高浓度刺五加苷作用效果最好,胞质内可见大量粗面内质网呈板层状排列,线粒体丰富,糖原数量多。（4）刺五加苷具有抗氧化作用。各浓度刺五加苷都可以升高衰老大鼠组织SOD、GSH-Px活性,抑制iNOS活性,降低MDA、NO浓度。高浓度刺五加苷提高GSH-Px、SOD活性、降低MDA和NO浓度、抑制iNOS活性的作用强于维生素E,中浓度提高GSH-Px活性、降低MDA浓度作用也强于维生素E,低浓度刺五加苷降低MDA和NO浓度作用弱于维生素E。（5）刺五加苷具有延缓免疫衰老作用。中、高浓度刺五加苷都可以提高衰老大鼠T淋巴细胞增殖功能和IL-2浓度,降低IL-6浓度,高浓度还可以降低TNF-α浓度。高浓度刺五加苷提高T淋巴细胞增殖功能和IL-2浓度作用,降低IL-6和TNF-α浓度作用都强于维生素E;中浓度提高T淋巴细胞增殖功能和IL-2浓度作用也强于维生素E,低浓度刺五加苷调节机体细胞免疫功能的作用与维生素E比较差异不明显。（6）刺五加苷具有抑制衰老相关-β-半乳糖苷酶活性和降低p16蛋白表达的作用。中、高浓度刺五加苷具有抑制大鼠衰老相关-β-半乳糖苷酶活性,降低组织p16蛋白表达的作用,低浓度只能抑制衰老相关-β-半乳糖苷酶活性。中、高浓度刺五加苷抑制组织衰老相关-β-半乳糖苷酶活性,降低组织p16蛋白表达作用强于维生素E;低浓度抑制组织SA-β-gal活性作用弱于维生素E。（7）小鼠胸腺细胞随着培养时间延长,会发生时间依赖性凋亡,表现为S期和G2/M期细胞比例减少,增值能力下降。50、100μmol/L刺五加苷可以增加胸腺小鼠细胞增值指数、抑制细胞凋亡,作用好于维生素E;20μmol/L刺五加苷能抑制细胞凋亡,作用效果与维生素E没有显著差异。通过以上研究,本课题得出刺五加苷具有延缓机体衰老的作用,其作用机理与刺五加苷提高机体抗氧化能力、增强细胞免疫功能、降低p16蛋白表达、促进胸腺细胞增殖、抑制细胞凋亡相关。

论文目录

• 摘要
• Abstracts
• 第一章 绪论
• 1.1 研究背景
• 1.2 研究现状和文献综述
• 1.2.1 刺五加的研究现状
• 1.2.2 衰老的研究现状
• 1.3 研究目的、意义及主要研究内容
• 1.3.1 研究目的
• 1.3.2 研究意义
• 1.3.3 主要研究内容
• 1.4 技术路线
• 第二章 刺五加苷对衰老大鼠功能的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 刺五加苷对衰老大鼠体质量的影响
• 2.2.2 刺五加苷对衰老大鼠脏器指数的影响
• 2.2.3 刺五加苷对衰老大鼠心电图的影响
• 2.2.4 刺五加苷对衰老大鼠学习记忆能力的影响
• 2.2.5 刺五加苷对衰老大鼠血细胞的影响
• 2.2.6 刺五加苷对衰老大鼠全血粘度的影响
• 2.2.7 刺五加苷对衰老大鼠血清生化指标的影响
• 2.2.8 刺五加苷对衰老大鼠血糖、血脂的影响
• 2.3 讨论
• 2.3.1 快速衰老动物模型的研究
• 2.3.2 刺五加苷对衰老大鼠体质量的影响
• 2.3.3 刺五加苷对衰老大鼠脏器指数的影响
• 2.3.4 刺五加苷对衰老大鼠心电图的影响
• 2.3.5 刺五加苷对衰老大鼠学习记忆能力的影响
• 2.3.6 刺五加苷对衰老大鼠血细胞和血粘度的影响
• 2.3.7 刺五加苷对衰老大鼠血清生化指标的影响
• 2.3.8 刺五加苷对衰老大鼠血糖、血脂的影响
• 2.4 结论
• 第三章 刺五加苷对衰老大鼠主要组织形态的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 主要材料
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 实验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 刺五加苷对衰老大鼠卵巢结构的影响
• 3.2.2 刺五加苷对衰老大鼠脑结构的影响
• 3.2.3 刺五加苷对衰老大鼠肝结构的影响
• 3.3 讨论
• 3.3.1 刺五加苷对衰老大鼠卵巢结构的影响
• 3.3.2 刺五加苷对衰老大鼠脑结构的影响
• 3.3.3 刺五加苷对衰老大鼠肝结构的影响
• 3.4 结论
• 第四章 刺五加苷对衰老大鼠抗氧化能力的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 主要材料
• 4.1.2 主要仪器
• 4.1.3 实验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 刺五加苷对衰老大鼠组织SOD活力的影响
• 4.2.2 刺五加苷对衰老大鼠组织MDA浓度的影响
• 4.2.3 刺五加苷对衰老大鼠组织NOS活力的影响
• 4.2.4 刺五加苷对衰老大鼠组织NO浓度的影响
• 4.2.5 刺五加苷对衰老大鼠组织GSH-Px活力的影响
• 4.3 讨论
• 4.3.1 刺五加苷对衰老大鼠SOD活力、MDA浓度的影响
• 4.3.2 刺五加苷对衰老大鼠NO浓度、NOS活力的影响
• 4.3.3 刺五加苷对衰老大鼠GSH-Px活力的影响
• 4.4 结论
• 第五章 刺五加苷对衰老大鼠免疫功能的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 主要材料
• 5.1.2 主要仪器
• 5.1.3 实验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 刺五加苷对衰老大鼠T淋巴细胞功能的影响
• 5.2.2 刺五加苷对衰老大鼠血清IL-2浓度的影响
• 5.2.3 刺五加苷对衰老大鼠血清IL-6浓度的影响
• 5.2.4 刺五加苷对衰老大鼠血清TNF-α浓度的影响
• 5.3 讨论
• 5.3.1 刺五加苷对衰老大鼠T淋巴细胞功能的影响
• 5.3.2 刺五加苷对衰老大鼠血清IL-2浓度的影响
• 5.3.3 刺五加苷对衰老大鼠血清IL-6浓度的影响
• 5.3.4 刺五加苷对衰老大鼠血清TNF-α浓度的影响
• 5.4 结论
• 第六章 刺五加苷对衰老大鼠衰老相关-β-半乳糖苷酶和p16蛋白的影响
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 主要材料
• 6.1.2 主要仪器
• 6.1.3 实验方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 刺五加苷对大鼠组织相关-β-半乳糖苷酶的影响
• 6.2.2 刺五加苷对大鼠组织P16蛋白的影响
• 6.3 讨论
• 6.3.1 刺五加苷对大鼠组织相关-β-半乳糖苷酶的影响
• 6.3.2 刺五加苷对大鼠组织P16蛋白的影响
• 6.4 结论
• 第七章 刺五加苷对小鼠胸腺细胞增殖和凋亡的影响
• 7.1 材料与方法
• 7.1.1 主要材料
• 7.1.2 主要仪器
• 7.1.3 实验方法
• 7.2 结果与分析
• 7.2.1 小鼠胸腺细胞的分离和复制周期的鉴定
• 7.2.2 刺五加苷对小鼠胸腺细胞毒性的检测
• 7.2.3 小鼠胸腺细胞周期的检测
• 7.2.4 刺五加苷对小鼠胸腺细胞增殖的影响
• 7.2.5 刺五加苷对小鼠胸腺细胞凋亡的影响
• 7.3 讨论
• 7.3.1 刺五加苷对小鼠胸腺细胞毒性的研究
• 7.3.2 小鼠胸腺细胞周期的变化
• 7.3.3 刺五加苷对小鼠胸腺细胞增殖功能的影响
• 7.3.4 刺五加苷对小鼠胸腺细胞凋亡的影响
• 7.4 结论
• 第八章 创新与展望
• 8.1 本论文的创新点
• 8.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 主要研究成果