脆化草鱼与普通草鱼肌肉特性比较及其CAST基因的克隆与表达

论文摘要

实验一:脆化草鱼与普通草鱼的肌肉特性比较以9尾体重为(1295.7±37.2)g的普通草鱼和9尾体重为(706.8±6.5)g脆化草鱼(脆肉鲩)为实验对象,对其肌肉理化及质构特性进行比较研究。结果显示:脆化草鱼肌肉粗蛋白含量高于普通草鱼(P<0.05),粗脂肪和铁含量比普通草鱼低(P<0.05),二者肌肉水分、粗灰分及钙、铬含量无显著差异;脆化草鱼肌肉pH、肌纤维密度和胶原蛋白含量均大于普通草鱼(P<0.05);脆化草鱼在2h和4h的肌肉滴水损失低于普通草鱼(P<0.05),但8h后差别不大;脆化草鱼肌肉硬度和咀嚼力均比普通草鱼高(P<0.05)。对肉质性状指标分析表明,在一定范围内,肌纤维密度、pH、胶原蛋白有提高肉质品质的作用趋势;肌肉脂肪含量与肌肉硬度,肌纤维密度与肌肉滴水损失之间均呈显著负相关(P<0.05)。通过主成分分析发现肌肉脂肪含量、肌纤维密度、胶原蛋白含量、肌肉pH值等是评价草鱼肌肉品质的重要指标。实验二:草鱼CAST基因克隆及在脆化草鱼和普通草鱼肌肉中的表达钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)是一种内源性的、专一的钙蛋白酶抑制剂,对肌肉生长和肌肉品质有重要影响。本实验以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)骨骼肌为试验材料,采用简并PCR方法,根据斑马鱼(danio rerio)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和大西洋鲑(salmo salar)CAST基因的序列,设计简并引物,克隆出大小为562bp,编码187个氨基酸的草鱼CAST基因片段。序列分析发现,草鱼CAST氨基酸序列与斑马鱼同源性最高,相似系数达75%,系统进化亲缘关系最近。各组织表达结果表明CAST基因在草鱼肠、心肌、腮、肝脏、脾脏、脑组织中均有表达。根据克隆测序序列设计特异性引物,运用荧光定量PCR的方法,测定普通草鱼和脆化草鱼肌肉CAST mRNA表达,结果发现脆化草鱼肌肉中CAST mRNA表达量显著高于普通草鱼(P<0.05)。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 1 肌肉品质相关指标
• 1.1 肌肉嫩度
• 1.2 胶原蛋白
• 1.3 肌肉脂肪含量
• 1.4 系水力（WHC）
• 1.5 pH 值
• 1.6 肌肉纤维密度、直径
• 2 肉质指标相关性研究
• 3 肌肉品质在分子水平上的研究
• 3.1 肌肉脂肪的调控
• 3.2 肌肉生长的调控
• 3.3 肌肉嫩度的调控
• 3.3.1 钙蛋白酶系统
• 3.3.2 钙蛋白酶
• 3.3.3 钙蛋白酶抑制蛋白
• 3.3.4 钙蛋白酶激活蛋白
• 3.3.5 钙蛋白酶抑制蛋白对钙蛋白酶的抑制作用
• 3.3.6 钙蛋白酶系统对肌肉嫩度的影响
• 3.3.7 CAST 基因多态性与肉质相关性研究
• 4 本研究的目的、意义
• 引言
• 第一章 脆化草鱼与普通草鱼的肉质特性比较
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 测定指标与方法
• 1.2.1 肌肉成分
• 1.2.2 肌肉物理特性
• 1.2.3 数据统计
• 2 结果与分析
• 2.1 肌肉一般营养成分
• 2.2 肉质主要指标
• 2.3 肌肉质构特性参数
• 2.4 肌肉品质指标相关性分析
• 2.5 主成分分析
• 3 讨论
• 3.1 肌肉一般营养成分对普通草鱼、脆化草鱼肌肉品质的影响
• 3.2 肌肉主要指标对普通草鱼、脆化草鱼肌肉品质的影响
• 3.3 肌肉肉质指标间的相关性分析
• 4 小结
• 第二章 草鱼CAST 基因克隆及在脆化草鱼与普通草鱼肌肉中的定量表达
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验样品
• 1.1.2 分子试验试剂
• 1.1.3 分子试验仪器
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 采样
• 1.2.2 总RNA 提取
• 1.2.3 1%琼脂糖凝胶电泳检测总RNA 质量及OD 值测定
• 1.2.4 反转录反应
• 1.2.5 引物的设计与合成
• 1.2.6 CAST 基因PCR 扩增反应
• 1.2.7 PCR 产物的克隆与测序
• 1.2.8 Quantitative real-time PCR
• 1.3 数据统计
• 2 结果与分析
• 2.1 总RNA 提取结果
• 2.2 草鱼CAST 基因RT-PCR 扩增结果
• 2.3 草鱼CAST 基因片段序列分析
• 2.3.1 草鱼CAST 基因片段序列
• 2.3.2 草鱼CAST 基因的氨基酸同源性及系统进化树
• 2.4 CAST 基因在草鱼各组织中的表达
• 2.5 Quantitative real-time RT-PCR 引物特异性检测
• 2.6 普通草鱼与脆化草鱼肌肉组织中CAST 基因的表达
• 3 讨论
• 3.1 草鱼CAST 基因的克隆
• 3.2 草鱼CAST 基因序列多重比对
• 3.3 草鱼CAST 基因氨基酸序列同源性分析
• 3.4 CAST 基因在草鱼各组织的表达
• 3.5 普通草鱼和脆化草鱼肌肉中CAST 基因的定量表达
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢