王春曾白华
（四川省绵阳市人民医院四川绵阳621000）
【摘要】目的：了解本地区泌尿生殖道支原体感染状况及耐药趋势。方法：回顾性分析本院2011～2015年5649例疑似泌尿生殖道支原体感染患者的解脲支原体(Uu)、人型支原体(Mh)检测结果，并对结果进行统计分析。结果：泌尿生殖道支原体检出率为47.27%，Uu、Mh、Uu+Mh检出率分别为11.61％、23.66％、36.19％。女性支原体检出率（52.63%)高于男性(33.71%)，差异有统计学意义（P<0.05）。连续五年支原体感染类型均以Uu感染为主，近年来Uu与Mh混合感染比例有所上升，构成比由13.15％上升到20.16％。Uu对环丙沙星、左氧氟沙星和螺旋霉素耐药率较高；Mh对罗红霉素、阿奇霉素和环丙沙星耐药率较高；Uu与Mh混合感染对罗红霉素，环丙沙星和左氧氟沙星耐药率较高。结论：本地区泌尿生殖道支原体感染以Uu感染为主，Uu与Mh混合感染耐药率高于单纯Uu及Mh感染。临床根据支原体培养及药敏监测结果合理用药，对获得最佳疗效并防止耐药菌株的产生至关重要。
【关键词】泌尿生殖道支原体；感染；耐药
【中图分类号】R69【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）21-0035-03
Analysisofurogenitalmycoplasmaresistance
WangChun,ZengBaihua.People’sHospitalofMianyangCity,SichuanProvince,Mianyang621000,China
【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinfectionstatusofurogenitalmycoplasmaandresistancetrendsinlocalarea.MethodsUreaplasmaurealyticum(Uu),Mycoplasmahominis(Mh)testresultsof5649patientssuspectedurogenitalmycoplasmainfectionwereanalyzedretrospectivelyfrom2011to2015,theresultswerestatisticallyanalyzed.ResultsThedetectionrateofurogenitalmycoplasmawas47.27%.Uu,Mh,UuandMhdetectionratewererespectively11.61%,23.66%,36.19%.Thedetectionrateofurogenitalmycoplasmainwomen(52.63%)washigherthaninmen(33.71%)andthedifferenceswerestatisticallysignificant(P<0.05).Continuouslyfor5years,Uuinfectionwasmaininurogenitalmycoplasmainfection.UuandMhmixedinfectionrateincreasedinrecentyears(from13.15%to20.16%).UuwashighlyresistanttoCiprofloxacin,LevofloxacinandSpiramycin;MhwashighlyresistanttoRoxithromycin,AzithromycinandCiprofloxacin;UuandMhmixedinfectionwashighlyresistanttoRoxithromycin,Ciprofloxacinandlevofloxacin.Uu,Mh,Uu+Mhdetectionrateofmulti-drugresistantinfectionswere11.61%,23.66%,36.19%.ConclusionsUuinfectionisthemainurogenitalmycoplasmainfectioninlocalarea.Theresistancerateofmixedinfectionishigherthansimpleinfection.Itisimportanttoobtainthebesteffectandpreventtheemergenceofresistantstrainsbytakingantibioticsappropriatelybasedonmycoplasmacultureanddrugsensitivityresults.
【Keywords】Urogenitalmycoplasma;Infection;Resistance
支原体是一种介于细菌和病毒之间，能在人工培养基上生长繁殖的原核细胞型微生物，广泛存在于自然界中。其中解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)定居在人类泌尿生殖道，是引起非淋菌性尿道(宫颈)炎(nongonococ—calurethrifts．NGU)及泌尿道／生殖道感染的主要病原体，与女性不孕、早产、流产及男性不育等密切相关[1-3]。近年来，由支原体引起的泌尿生殖系统感染呈上升趋势。抗生素的不规范用药导致耐药菌株不断增多，给临床治疗带来困难。为了解本地区支原体感染及耐药状况，指导临床合理用药，本文对我院2011年1月～2015年12月支原体培养及药敏试验结果进行总结分析，现将结果报道如下。
l.资料与方法
1.1一般资料
2011年1月～2015年12月来我院妇科和泌尿外科就诊的疑似泌尿生殖道感染患者5649例，其中男1602例，女4047例，年龄18～52岁；患者取标本前一周停用抗菌药物，标本为尿道分泌物、前列腺液、精液、阴道分泌物及宫颈分泌物等。
1.2标本采集
男性消毒尿道口后，将无菌棉拭子插入尿道口1～2cm，旋转360o，取尿道分泌物；男性也可留取前列腺液、精液。女性先用无菌棉签拭去宫颈分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈1～3cm，停留l0～20秒转动后取出；对阴道分泌物的标本，应全面彻底地刮取黏膜以获得尽量多的柱状上皮细胞，立即放入运送培养基送检。
1.3试剂和检测方法
采用珠海市银科医学工程有限公司生产的解脲支原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒进行支原体培养和药敏试验，将100ul混有标本的培养基加入到除阴性对照孔的其余微孔中，每孔覆盖2滴石蜡油密封，放入35℃恒温箱培养。
1.4结果判断
24h时观察Uu是否阳性，48h观察Mh是否阳性及药敏结果。将支原体数量≥104CCU作为阳性判断标准；严格按照试剂盒操作说明进行。如果培养液和实验孔呈清晰透明红色则为阳性，黄色或橙黄色为阴性，浑浊红色则视为污染。该试剂盒共设阴性对照孔、Uu检测孔和Mh检测孔，12种抗生素各设高浓度(上排孔)和低浓度(下排孔)2种浓度，2孔均阴性为敏感，仅下排孔阳性则为中介，2孔均阳性为耐药。12种抗生素为强力霉素(DOX)、美满霉素(MIN)、环丙沙星(CPF)、氧氟沙星(OFL)、司帕沙星(SPA)、罗红霉素(ROX)、阿奇霉素(AZI)、克拉霉素(CLA)、交沙霉素(JOS)、壮观霉素(SPE)、螺旋霉素、(ASP)、左旋氧氟(LEV)。
1.5统计学方法
采用SPSS15.0进行统计学分析处理。以P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1泌尿生殖道支原体感染的阳性检出率
2011～2015年5649例送检标本检测出支原体感染者2670例，阳性率为47.27%。其中女性2130例(52.63%)，男性540例(33.71%)，女性检出率明显高于男性，（P<0.05），具体见表1。
表15469例送检标本支原体检测结果[n（%）]
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△：与女性感染者比较，P＜0.05
2.2连续五年支原体检出构成情况
连续五年支原体感染类型均以Uu感染为主，近年来Uu+Mh混合感染比例有所上升，构成比由13.15％上升到20.16％，而Uu感染构成比则从83.67％降至76.12％，Mh感染五年变化不大，构成比为2.95～3.88％。见表2。
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2.3五年间单纯Uu和Mh感染及Uu+Mh混合感染的耐药变迁
2011～2015连续五年耐药监测结果显示，Uu、Mh、Uu+Mh对本文统计的十二种抗菌药物表现出不同程度的耐药性，其中强力霉素、美满霉素、交沙霉素敏感性较高，稳定性也较好，连续五年监测耐药率均<15％；单纯Uu感染耐药率居前三位的抗生素是环丙沙星(46.46～53.42％)％、左氧氟沙星(47.62～51.53％)和螺旋霉素(38.49～43.33％)，单纯Mh感染耐药率前三位的抗生素是罗红霉素(57.14～70.37％)、阿奇霉素(42.80～66.67％)和环丙沙星(50.00～65.00)；Uu+Mh混合感染型对红霉素类及氟喹诺酮类抗生素耐药性均较高，耐药率前三位的抗生素是罗红霉素(79.03～84.85％)，环丙沙星(72.73～83.08％)和左氧氟沙星(62.07～66.15％)。Uu+Mh混合感染耐药性高于单纯Uu及Mh感染。具体耐药率见表3。
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3.讨论
支原体为条件致病菌，可寄居于泌尿生殖道，当机体抵抗力降低或粘膜受损时可出现感染症状。从人类泌尿生殖道分离出的7种支原体中，分离率较高与泌尿生殖道疾病有关的是Uu，其次是Mh。Uu与Mh主要传播途径为性接触传播和母婴传播，由于Uu在健康人群中较高的携带率，尤其是性成熟的女性的生殖道中可处于正常携带状态，只有定植部位的支原体达到一定数量后才会致病，临床上Uu+Mh培养及药敏试验以支原体数量≥104CCU作为支原体感染的阳性判断标准，支原体感染患者菌量的多少和有无症状是考虑用药的重要参考。
支原体的致病原因目前认为可能与侵袭性酶和毒性产物有关。其产生的IgA蛋白酶可破坏泌尿道黏膜表面的IgA局部抗感染作用，有利于uu黏附于泌尿道生殖道黏膜表面，夺取宿主的营养物质，影响蛋白质的合成。释放的磷脂酶可直接损伤机体细胞并引起炎性反应。支原体代谢产生的有毒物质，如溶神经支原体能产生神经毒素，引起细胞膜损伤。脲原体含有尿素酶，可以水解尿素产生大量氨，对宿主细胞有毒害作用。支原体粘附于精子表面，可阻止精子运动，造成精子膜的破坏，其产生神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合。引起不孕不育。另外支原体感染还与HPV感染及宫颈癌的发生相关。Biernat—Sudolska等发现[4]，人乳头瘤病毒阳性病例中解脲支原体检出率较高，且宫颈癌患者解脲支原体的感染率也高于对照组。所以，临床上对于一些其它相应检测手段没有检测出病原菌，又有明显感染现象的泌尿生殖道感染，以及不明原因的不孕不育患者应考虑是否为支原体感染，并做相应实验室检测以明确诊断。
支原体检测方法主要有培养法和PCR法2种，其中Uu和Mh培养及药敏检测方法，因可为临床合理用药提供指导而被广泛应用。本文统计数据即来源于Uu和Mh培养及药敏检测结果。统计显示，我院2011～2015年泌尿生殖道支原体感染阳性率为47.27%，其中女性2130例(52.63%)，男性540例(33.71%)，女性检出率明显高于男性，与相关报道相符[5-6]。不同地区及不同医院的支原体感染率存在差异，可能与就诊人群不同有关。而女性检出率高于男性，可能与女性泌尿生殖道的生理结构相关，支原体在性成熟的女性的生殖道中可处于正常携带状态，当机体免疫力下降或菌群失调时引起感染，而男性尿道长，且多处于无菌及少量带菌状态[7]。另外女性感染支原体后症状不典型，未用或不规范用药也可导致感染率增高。从感染构成情况分析，五年支原体感染均以单纯Uu感染为主，其次为混合感染，Mh单独感染较少，与文献报道相似。Uu感染率高可能与Uu具有特殊的顶端结构，能够牢固黏附于靶细胞表面有关[8]。近年来Uu+Mh混合感染比例有所上升，构成比由13.15％上升到20.16％，由于Uu+Mh混合感染的上升，可导致诊治难度的增加，应引起临床重视。
支原体是一种介于细菌和病毒之间的微生物，没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如B一内酰胺类抗生素(青霉素类、头孢菌素等）天然耐药，对抑制DNA旋转酶的药物喹诺酮类及干扰蛋白质合成的药物大环内酯类、四环素类较敏感。但由于临床不规范用药，支原体对上述敏感抗生素类也产生了不同程度的耐药性。支原体对抗生素耐药性不同地区存在差异[9-10]。我院2011～2015连续五年耐药监测结果统计显示，Uu、Mh、uu+Mh三类支原体感染对喹诺酮类药物均表现出较高的耐药性，单纯Uu感染耐药率居前三位的抗生素是环丙沙星(46.46％～53.42％)、左氧氟沙星(47.62～51.53％)和螺旋霉素(38.49～43.33％)，单纯Mh感染耐药率前三位的抗生素是罗红霉素(57.14～70.37％)、阿奇霉素(42.80～66.67％)和环丙沙星(50.00～65.00)；uu+Mh混合感染型耐药率前三位的抗生素是罗红霉素(79.03～84.85％)，环丙沙星(72.73～83.08％)和左氧氟沙星(62.07～66.15％)。三类支原体感染对喹诺酮类药物均表现出较高的耐药性，可能与既往临床长期广泛应用有关，提示哇诺酮类药物在治疗支原体感染中已不应作为首选药物。喹诺酮类药物耐药原因在于菌株DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ序列碱基突变，导致相应氨基酸改变，从而使酶蛋白空间构象改变，使得喹喏酮类药物不能与酶蛋白一DNA复合体结合，从而产生耐药性[11]。另外统计结果显示支原体耐药性因分型的不同呈现一定的差异，统计结果显示，Mh感染构成比（2.95～3.88％）相对较低，五年变化不大，但它的耐药性确高于Uu感染，并且耐药谱也有所差异。本文统计单纯Mh及uu+Mh混合感染对大环内酯类抗生素耐药率高于Uu感染。大环内酯类抗生素可不可逆的与核糖体50S亚基结合。其耐药可能是支原体改变了与抗生素结合的核蛋白体结合部位，使其结合能力下降所致。从五年总的耐药情况看，未出现明显趋势性升高的情况。耐药性较低的抗生素为强力霉素、美满霉素和交沙霉素，连续五年监测耐药率均<15％，四环素类耐药率低，与文献报道相近[12]，提示在支原体感染的治疗上四环素类药物是首选。
近年来，由于抗生素的不规范使用，支原体感染中三种以上药物出现耐药(即多重耐药)的情况逐渐增多，而这方面的相关报道相对减少，为了解该地区支原体对本文中十二种抗菌药物的多重耐药发生情况，本文从全部耐药、全部敏感、多重耐药三方面对Uu、Mh、Uu／Mh感染的药敏情况进行了统计分析，结果显示未查见全部耐药的支原体菌株，但多重耐药情况严重，Uu／Mh混合感染多重耐药率达36.49%，单纯Mh和Uu感染多重耐药也占一定比例，应引起临床注意。Uu+Mh混合感染比例有所上升，其耐药现象突出临床治疗更加困难。本研究中Uu／Mh混合感染时各类抗菌药的耐药率要比单纯uu或单纯Mh感染时高，可能是二种支原体的耐药性出现叠加效应所致。与国内外报道支原体混合感染中更易出现药物的交叉耐药相符[13-14]。
综上所述，该地区支原体感染发生率高，支原体耐药及多重耐药情况严重，不同地区、不同时间支原体对抗生素耐药性存在差异，临床根据实验室的药敏结果合理规范用药可减少耐药菌株的产生，有效控制支原体感染。
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