干细胞抗缺血再灌注诱发的肾小管坏死性和凋亡性细胞死亡

论文摘要

目的:观察和分析骨髓间充质干细胞（MSCs）对缺血再灌注（IR）诱发的肾小管坏死性与凋亡性细胞死亡的影响,探讨骨髓间充质干细胞移植是否有助于缺血再灌注损伤后肾小管的修复及其结构完整性的维持。方法:采用Percoll 密度梯度离心法从雄性SD 大鼠双侧后肢骨髓组织中分离获取骨髓间充质干细胞,用荧光染料DAPI 对其进行标记。将48 只雌性、体重200+10g 的SD 大鼠随机分成8 个组:（1）IR-24h 移植组,（2）IR-24h对照组,（3）IR-48h 移植组,（4）IR-48h 对照组,（5）IR-7d 移植组,（6）IR-7d对照组,（7）IR-14d 移植组,（8）IR-14d 对照组;采用夹闭双侧肾蒂以阻断肾脏血流45min 后再恢复血流灌注的方法复制肾缺血再灌注损伤模型,在各组相应之再灌注时间点进行肾脏标本的收集和初步处理。在荧光显微镜下观察骨髓间充质干细胞移植后肾组织石蜡切片中MSCs-DAPI 的标记情况;在普通光学显微镜下对HE 染色的各组肾组织石蜡切片做形态学观察;应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dNTP 缺口末端标记技术（TUNEL）检测缺血再灌注24h 与48h 各组大鼠肾组织切片中的凋亡细胞,计数并做统计学分析;应用小鼠抗大鼠增殖细胞核抗原（PCNA）单克隆抗体对缺血再灌注7d 与14d各组大鼠肾组织切片进行免疫组织化学染色,观察PCNA 的表达情况,计数阳性细胞并做统计学分析。结果:由每只大鼠双侧后肢骨髓组织中分离得到的间充质干细胞数量级均可达到106（2～6×106）,体外DAPI 标记率为100%。荧光显微镜下,骨髓间充质干细胞移植后7d、14d 的大鼠肾脏石蜡切片中均可见到DAPI 标记阳性的细胞存在,这些细胞散在分布,部分存在于肾小管间质内,部分存在于肾小管上皮组织中。HE 染色发现:IR-24h 对照组和IR-48h 对照组样本中肾小

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 前言
• 四 材料与方法
• 五 结果
• 六 讨论
• 七 结论
• 八 参考文献
• 九 附图
• 十 致谢
• 十一 综述