本文主要研究内容
作者何玲（2019）在《穿透支原体Ferritin的表达、纯化及其抗氧化活性研究》一文中研究指出：背景:穿透支原体(M.penetrans,Mpe)是一种与艾滋病相关的支原体,因其能黏附并穿透真核细胞膜而得名。现在发现Mpe除了与艾滋病相关外,还与肿瘤的发生和发展也具有密切关系。人的免疫系统会产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)来抵御病原菌的入侵。故Mpe在黏附感染并进入到宿主的过程中不可避免会遇到大量的ROS,抗氧化能力的强弱对于Mpe在宿主体内的存活及致病都极为重要。但迄今为止,Mpe的抗氧化机制仍不清楚。目的:本文构建能够表达穿透支原体Ferritin蛋白的原核表达质粒p ET15b-Ferritin,诱导表达Ferritin蛋白并利用亲和层析纯化,检测Ferritin蛋白的抗氧化活性,并测定它的免疫原性,为研究Ferritin蛋白在Mpe致病过程中的功能提供实验基础。方法:1.利用生物信息学方法分析Mpe的Ferritin蛋白的二级结构和三级结构等生物学特性。2.合成能够在大肠杆菌中表达全长Ferritin蛋白的编码基因,根据Ferritin基因序列设计特异性PCR引物,PCR扩增Ferritin基因。使用Nde I和Bam H I将Ferritin基因和表达质粒p ET15b进行双酶切,回收酶切产物,并用T4 DNA连接酶进行连接,获得重组质粒p ET15b-Ferritin,然后把重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21,得到重组菌BL21/p ET15b-Ferritin。3.使用IPTG诱导重组菌BL21/p ET15b-Ferritin以表达重组蛋白Ferritin,并利用Ni2+亲和层析法进行纯化,然后去内毒素并使用BCA法进行蛋白定量。4.利用分光光度法测定Ferritin蛋白的亚铁氧化酶活性,并测定Ferritin蛋白的抗氧化活性。5.测定能表达Ferritin蛋白的大肠杆菌和对照菌大肠杆菌在H2O2处理后的生长情况。6.将Ferritin蛋白免疫小鼠,获得抗血清,并测定其抗体滴度。结果:1.Mpe Ferritin基因全长为540 bp,编码180个氨基酸。Ferritin蛋白定位于细胞质,无信号肽。它的α-螺旋占71.5%,β-转角为6.7%,延伸链占5.0%,无规卷曲占16.8%。三级结构是由24个同源Ferritin蛋白分子组成的24聚体。Ferritin蛋白具有多个B细胞表位。2.成功构建了能编码含His标签的重组Ferritin蛋白的重组表达质粒p ET15b-Ferritin。将其转化到BL21得到重组菌BL21/p ET15b-Ferritin,IPTG能诱导重组菌表达22.9 k Da的重组Ferritin蛋白,亲和层析法获得了较高纯度的重组Ferritin蛋白。3.Ferritin蛋白能够快速催化Fe2+为Fe3+,具有亚铁氧化酶功能;Ferritin蛋白羟基自由基清除的半抑制浓度(IC50)为0.51 mg/m L,明显要低于BSA蛋白的IC50值(0.80 mg/m L)(p<0.05)。4.在H2O2处理后,转化p ET15b-Ferritin的大肠杆菌比转化p ET15b空载体的对照菌的存活率要高。5.将Ferritin蛋白免疫小鼠后,能够刺激小鼠分泌高滴度的抗体。结论:1.Mpe Ferritin具有亚铁氧化酶活性和抗氧化功能,能够提高大肠杆菌抵抗H2O2胁迫的能力,表明Mpe Ferritin蛋白具有抗氧化功能。2.Ferritin蛋白能够诱导小鼠分泌高滴度的抗体。
Abstract
bei jing :chuan tou zhi yuan ti (M.penetrans,Mpe)shi yi chong yu ai zi bing xiang guan de zhi yuan ti ,yin ji neng nian fu bing chuan tou zhen he xi bao mo er de ming 。xian zai fa xian Mpechu le yu ai zi bing xiang guan wai ,hai yu zhong liu de fa sheng he fa zhan ye ju you mi qie guan ji 。ren de mian yi ji tong hui chan sheng da liang de huo xing yang zi you ji (reactive oxygen species,ROS)lai di yu bing yuan jun de ru qin 。gu Mpezai nian fu gan ran bing jin ru dao su zhu de guo cheng zhong bu ke bi mian hui yu dao da liang de ROS,kang yang hua neng li de jiang ruo dui yu Mpezai su zhu ti nei de cun huo ji zhi bing dou ji wei chong yao 。dan qi jin wei zhi ,Mpede kang yang hua ji zhi reng bu qing chu 。mu de :ben wen gou jian neng gou biao da chuan tou zhi yuan ti Ferritindan bai de yuan he biao da zhi li p ET15b-Ferritin,you dao biao da Ferritindan bai bing li yong qin he ceng xi chun hua ,jian ce Ferritindan bai de kang yang hua huo xing ,bing ce ding ta de mian yi yuan xing ,wei yan jiu Ferritindan bai zai Mpezhi bing guo cheng zhong de gong neng di gong shi yan ji chu 。fang fa :1.li yong sheng wu xin xi xue fang fa fen xi Mpede Ferritindan bai de er ji jie gou he san ji jie gou deng sheng wu xue te xing 。2.ge cheng neng gou zai da chang gan jun zhong biao da quan chang Ferritindan bai de bian ma ji yin ,gen ju Ferritinji yin xu lie she ji te yi xing PCRyin wu ,PCRkuo zeng Ferritinji yin 。shi yong Nde Ihe Bam H Ijiang Ferritinji yin he biao da zhi li p ET15bjin hang shuang mei qie ,hui shou mei qie chan wu ,bing yong T4 DNAlian jie mei jin hang lian jie ,huo de chong zu zhi li p ET15b-Ferritin,ran hou ba chong zu biao da zhi li zhuai hua dao da chang gan jun BL21,de dao chong zu jun BL21/p ET15b-Ferritin。3.shi yong IPTGyou dao chong zu jun BL21/p ET15b-Ferritinyi biao da chong zu dan bai Ferritin,bing li yong Ni2+qin he ceng xi fa jin hang chun hua ,ran hou qu nei du su bing shi yong BCAfa jin hang dan bai ding liang 。4.li yong fen guang guang du fa ce ding Ferritindan bai de ya tie yang hua mei huo xing ,bing ce ding Ferritindan bai de kang yang hua huo xing 。5.ce ding neng biao da Ferritindan bai de da chang gan jun he dui zhao jun da chang gan jun zai H2O2chu li hou de sheng chang qing kuang 。6.jiang Ferritindan bai mian yi xiao shu ,huo de kang xie qing ,bing ce ding ji kang ti di du 。jie guo :1.Mpe Ferritinji yin quan chang wei 540 bp,bian ma 180ge an ji suan 。Ferritindan bai ding wei yu xi bao zhi ,mo xin hao tai 。ta de α-luo xuan zhan 71.5%,β-zhuai jiao wei 6.7%,yan shen lian zhan 5.0%,mo gui juan qu zhan 16.8%。san ji jie gou shi you 24ge tong yuan Ferritindan bai fen zi zu cheng de 24ju ti 。Ferritindan bai ju you duo ge Bxi bao biao wei 。2.cheng gong gou jian le neng bian ma han Hisbiao qian de chong zu Ferritindan bai de chong zu biao da zhi li p ET15b-Ferritin。jiang ji zhuai hua dao BL21de dao chong zu jun BL21/p ET15b-Ferritin,IPTGneng you dao chong zu jun biao da 22.9 k Dade chong zu Ferritindan bai ,qin he ceng xi fa huo de le jiao gao chun du de chong zu Ferritindan bai 。3.Ferritindan bai neng gou kuai su cui hua Fe2+wei Fe3+,ju you ya tie yang hua mei gong neng ;Ferritindan bai qiang ji zi you ji qing chu de ban yi zhi nong du (IC50)wei 0.51 mg/m L,ming xian yao di yu BSAdan bai de IC50zhi (0.80 mg/m L)(p<0.05)。4.zai H2O2chu li hou ,zhuai hua p ET15b-Ferritinde da chang gan jun bi zhuai hua p ET15bkong zai ti de dui zhao jun de cun huo lv yao gao 。5.jiang Ferritindan bai mian yi xiao shu hou ,neng gou ci ji xiao shu fen bi gao di du de kang ti 。jie lun :1.Mpe Ferritinju you ya tie yang hua mei huo xing he kang yang hua gong neng ,neng gou di gao da chang gan jun di kang H2O2xie pai de neng li ,biao ming Mpe Ferritindan bai ju you kang yang hua gong neng 。2.Ferritindan bai neng gou you dao xiao shu fen bi gao di du de kang ti 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自南华大学的何玲，发表于刊物南华大学2019-10-28论文，是一篇关于穿透支原体论文,铁蛋白论文,活性氧论文,免疫原性论文,南华大学2019-10-28论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自南华大学2019-10-28论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：穿透支原体论文; 铁蛋白论文; 活性氧论文; 免疫原性论文; 南华大学2019-10-28论文;