LPS诱导鸡淋巴细胞chTLR4及其信号通路表达规律的研究

LPS诱导鸡淋巴细胞chTLR4及其信号通路表达规律的研究

论文摘要

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一类高度保守的病原模式识别受体家族,在机体的天然免疫反应中发挥着非常重要的作用,此外它还能通过提供刺激性的信号激发获得性免疫,所以,TLR家族被认为是天然性免疫和获得性免疫的重要连接点。在TLRs家族中,最早发现的是Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLRs4), TLR4可以识别多种配体,但最主要的配体是脂多糖(LPS),大量的实验证明TLR4在革兰氏阴性菌感染过程中扮演了非常重要的角色。因此,深入研究TLR4的机能特点,对于有效启动机体的免疫功能和控制炎症反应均具有十分重要的意义。目前有关哺乳类动物TLR4研究的相关报道比较多,而对于家禽类TLR4及其信号传导通路的研究报道较少。本实验用LPS刺激分离培养的鸡淋巴细胞,通过Real-time PCR方法分别在6h,12h,24h,48h和72h检测细胞中chTLR4和NF-KBp65 mRNA的表达水平;用ELISA方法检测脾脏和血液淋巴细胞核内NF-KBp65和培养上清液IL-1β浓度的变化,从基因和蛋白水平对chTLR4及其信号通路的作用特点进行了初步的研究;同时,测定了广谱抗菌抑炎药—氟苯尼考对LPS诱导作用的影响。结果显示,脾脏淋巴细胞中chTLR4 mRNA表达量均比空白对照组的高,实验组在LPS刺激后6h开始升高,在24h达到最高,之后便开始下降,且与对照组相比在12h差异显著(p<0.05),24h差异极显著(p<0.01)。NF-KBp65 mRNA表达量均比空白对照组的高,实验组在LPS刺激后6h开始升高,在24h达到最高,之后便开始下降,且与对照组相比在12h和36h差异显著(p<0.05),24h差异极显著(p<0.01)。ELISA检测结果显示:各实验组所测得的IL-1p和NF-κBp65因子浓度都非常低,但各组之间的差异还是存在的。LPS组IL-1p和NF-κBp65因子浓度明显上升,在12h,24h,48h与对照组差异显著(p<0.05);氟苯尼考组IL-1 p和NF-κBp65浓度下降,且在24h与对照组有显著差异(p<0.05);LPS+氟苯尼考组,IL-1β和NF-κBp65浓度与对照组均无显著差异(p>0.05)。上述结果表明:LPS能够被体外分离培养的淋巴细胞所识别,并激活chTLR4及其信号传导通路,但其反应比较微弱。氟苯尼考对LPS所诱导的反应有抑制作用,其机理有待进一步研究。

论文目录

  • 前言
  • 摘要
  • Abstract
  • 引言
  • 第一篇 文献综述
  • 第1章 TLRs的研究进展
  • 1.1 TLRs的基本结构和基因定位
  • 1.2 TLRs的生物学功能
  • 1.3 TLRs的信号传导通路
  • 1.4 TLR4与LPS的研究进展
  • 第2章 鸡TLRs研究进展
  • 2.1 鸡TLRs的几个主要成员
  • 2.2 氟苯尼考的研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • 第1章 LPS诱导鸡淋巴细胞cHTLR4及NF-KBP65基因表达规律的研究
  • 1.1 材料和方法
  • 1.2 结果
  • 1.3 讨论
  • 1.4 小结
  • 第2章 LPS诱导鸡淋巴细胞NF-KBP65活化、IL-1B分泌特点及氟苯尼考对其影响的研究
  • 2.1 材料和方法
  • 2.2 结果
  • 2.3 讨论
  • 2.4 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 导师简介
  • 个人简介
  • 相关论文文献

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