论文摘要
第一部分:X射线对花背蟾蜍胚胎发育的影响。以无尾两栖类-花背蟾蜍25、30、36和39期蝌蚪为实验材料,用医用直线加速器产生的X射线连续照射3天,照射剂量分别为0、1、3、5、7、9Gy,辐照完1周后包氏液固定肝脏,常规石蜡包埋切片,苏木精-伊红染色,光镜观察不同剂量X射线照射后蝌蚪肝脏显微结构的变化;并检测整体蝌蚪SOD、CAT、LDH活性和MDA含量的变化。结果表明25、30、36和39期蝌蚪经x射线照射一周后,随着辐射剂量的增加,25和30期蝌蚪的SOD和CAT活性先升高后降低;36期蝌蚪的SOD活性和CAT活性均比对照组高,且随着剂量的增加,SOD活性降低,CAT活性先升高后降低。39期蝌蚪的SOD活性均比对照组降低,CAT活性先升高后降低。SOD和CAT的活性变化显著,对X射线表现了较高的敏感性。SOD和CAT活性降低,说明蝌蚪体内积累了大量的活性氧。而且随着蝌蚪胚胎的发育,从25期到39期,在同一剂量下蝌蚪的SOD和CAT活性均升高,说明随着胚胎向成体的过渡,对辐射的敏感性降低。结果还显示,在5个不同剂量的连续辐照下,4个时期蝌蚪的MDA含量均比对照组高,且随着照射剂量的增加,MDA含量逐渐升高。这与SOD降低相对应,更说明蝌蚪体内积累了大量的活性氧。LDH活性与对照组相比,也发生了变化:25期和39期蝌蚪的LDH活性先降低后升高,30期蝌蚪的LDH活性先升高后降低,36期蝌蚪的LDH活性均升高。组织切片结果显示蝌蚪经X射线连续3天的照射一周后,不同剂量照射组中肝脏受到了不同程度的损伤,表现为肝细胞网孔增加和细胞集化。结论:X射线对花背蟾蜍胚胎发育产生了一定的影响,连续照射使得蝌蚪体内积累了活性氧,照射组蝌蚪几种酶活性与对照组相比都有差异,肝脏也受到了不同程度的损伤,结构发生了变化;随着胚胎向成体的过渡,动物机体对辐射的敏感性降低。第二部分:花背蟾蜍胎肺蛋白及4种脊椎动物肺蛋白的差异表达。两栖类的变态发育是进化史上的一个飞跃,是动物由水生向陆生,从用鳃呼吸向用肺呼吸的重大转变,这个转变在动物进化史上有着重要的地位。在这个变态发育过程中一定伴随着蛋白质的差异表达,通过比较这些差异蛋白质的表达,试图找出对蝌蚪变态发育过程起重要作用的一些蛋白质,并对此类蛋白的相关特性、功能等进行分析研究就显得至关重要。本研究选取36、37、38和39期蝌蚪的肺组织,运用SDS-PAGE技术对花背蟾蜍胚胎发育过程中的肺组织蛋白进行了比较分析,有助于从分子水平探讨胚胎肺组织发育过程中蛋白质的差异表达。结果表明,随着蝌蚪变态发育,肺组织蛋白在数量和含量上都有了一定的变化,36和37期蝌蚪肺蛋白有相似的表达,而在38期和39期都有新的蛋白表达。肺是脊椎动物重要的呼吸器官,而蛋白质是肺组织的主要组成部分,因此随着脊椎动物由简单到复杂、低等到高等的变化,肺组织蛋白的表达也会有所差异。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描对花背蟾蜍、密点麻蜥、红腹锦鸡和Wistar大鼠4种脊椎动物肺组织中的低分子蛋白质进行比较分析,结果表明花背蟾蜍、密点麻蜥、红腹锦鸡和大鼠肺组织蛋白质条带逐渐增加,分别为19、20、20、24条,4种动物肺组织共有的蛋白质条带有11条。仅花背蟾蜍、密点麻蜥和大鼠肺组织共同表达的蛋白质条带有2条;仅花背蟾蜍、红腹锦鸡和大鼠肺组织表达的蛋白质有1条;仅密点麻蜥、红腹锦鸡和大鼠肺组织表达的蛋白质有2条;仅花背蟾蜍和密点麻蜥肺组织表达的蛋白质有3条;仅红腹锦鸡和大鼠肺组织表达的蛋白质有5条;仅密点麻蜥和大鼠肺组织表达的蛋白质有1条;并且4种脊椎动物肺组织有各自的特异蛋白。
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