磺胺脒残留单克隆抗体的筛选与制备

论文摘要

磺胺脒（SG）是一种良好的肠道消毒剂,在水产上应用广泛。磺胺脒毒性较大,可引起肝、肾的损伤,导致机体贫血,且易引起致病菌产生抗药性。水产品中的磺胺脒残留影响了我国水产品质量安全,威胁消费者健康,也阻碍了水产品出口贸易。磺胺脒残留的分析方法主要是仪器法,如高效液相色谱法（HPLC）、质谱联用等。仪器法的样品前处理步骤繁琐,检测成本较高,不适宜大批量样品的筛选检测,更不适应快速简便的市场监督需求,研究开发一种快速简便高通量的SG残留检测技术已迫在眉睫。酶联免疫吸附检测法（ELISA）作为一种快速、简便、特异性好和灵敏度较高的免疫测定技术,正被逐步应用于磺胺类药物残留的定性和定量检测。本研究的目的是筛选和制备磺胺脒单克隆抗体,为建立磺胺脒免疫学检测方法和研制检测试剂盒提供基础材料。本研究分别采用重氮法和戊二醛法,将半抗原磺胺脒与小牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联,用紫外光谱、红外光谱、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定偶联结果,计算结合比。利用凝胶过滤层析技术分离纯化人工抗原。重氮法、戊二醛法合成的SG-BSA偶联结合比分别为8.5:1和6:1,SG-OVA偶联结合比为4:1。紫外光谱、红外光谱分析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确证了偶联成功。用SG-BSA免疫BALB/c雌性小鼠,用间接ELISA方法检测血清效价,当效价达到1:10000以上时,进行细胞融合实验。取高效价的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,在融合后第7天出现小的克隆,第13天杂交瘤细胞铺满孔底70%,用建立的间接ELISA法筛选阳性孔。细胞融合率为67.9%,阳性克隆率为1.1%。筛选共得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为4D11。本研究利用重氮偶连法和戊二醛法成功制备免疫原和包被原,利用细胞融合技术,成功制备了一株抗磺胺脒的单克隆抗体细胞株,为建立磺胺脒免疫学检测方法和研制检测试剂盒奠定了坚实基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 文献综述
• 1.1 概述
• 1.2 磺胺类药物残留
• 1.3 磺胺类药物残留分析方法
• 1.4 本研究的研究背景、目的及意义
• 第二章 磺胺脒免疫原和包被原的制备与鉴定
• 2.1 研究目的
• 2.2 实验材料
• 2.3 实验方法
• 2.4 结果与分析
• 2.5 讨论
• 2.6 小结
• 第三章 动物免疫及其血清效价检测
• 3.1 研究目的
• 3.2 实验材料
• 3.3 实验方法
• 3.4 结果与分析
• 3.5 讨论
• 3.6 小结
• 第四章 磺胺脒单克隆抗体的筛选制备
• 4.1 研究目的
• 4.2 实验材料
• 4.3 实验方法
• 4.4 结果与分析
• 4.5 讨论
• 4.6 小结
• 第五章 结论
• 参考文献
• 缩略词表
• 致谢
• 在校期间发表论文