论文摘要
目的:人肿瘤细胞的裸鼠致瘤性试验是肿瘤生物学研究的一项重要指标,已经广泛的应用于各种肿瘤的发病机制和治疗研究。我们通过建立裸鼠高成瘤性的人急性粒细胞白血病细胞（HL-60）系,并运用差异蛋白质组学的方法,筛选并鉴定致瘤性不同的细胞系的差异表达蛋白质,以期为白血病细胞裸鼠致瘤性发生和发展的分子机制提供思路。方法:采用体内接种和体外传代相结合的方法建立裸鼠成瘤率依次提高的HL-60细胞系,利用2D-DIGE技术对比HL-60细胞系在裸鼠体内连续4次致瘤后,随着致瘤率依次提高的差异表达蛋白质。应用DeCyder6.5图像分析软件筛选HL-60细胞和高致瘤HL60-4之间显著上调或显著下调的差异蛋白点,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行基因表达产物鉴定,根据Swiss-Prot/UniProt库的注释信息对鉴定的蛋白质进行功能和细胞定位分析。结果:1.成功建立了裸鼠致瘤性逐渐增高的HL-60细胞系。HL-60初次接种,致瘤率30%;HL60-1第二次接种致瘤率50%;HL60-2第三次接种致瘤率80%;HL60-3第四次接种致瘤率100%;最后得到高致瘤性的HL60-4细胞。2.通过DIGE双向电泳技术比较HL-60细胞系和高致瘤HL60-4细胞之间的差异表达蛋白,筛选出87个差异蛋白点,经过MALDI-TOF-MS分析,其中有64个蛋白点得到鉴定,对应于24种基因表达产物。其中有10个蛋白质在高致瘤HL60-4细胞中显著上调,13个蛋白质在高致瘤HL60-4细胞显著下调。对鉴定出来的蛋白进行功能分类:包括核酸连接蛋白、细胞骨架、分子伴侣、转录因子、转移酶、蛋白代谢和修饰、糖代谢、氨基酸代谢、免疫和防御功能等。尤为重要的发现是,核不均一核糖核蛋白H随着裸鼠致瘤性的提高,依次在HL-60,HL60-1、HL60-2、HL60-3、HL60-4细胞中出现上调变化趋势;而谷胱甘肽硫-转移酶π和烯醇化酶1出现下调变化趋势。结论:1.本实验通过体外传代和裸鼠体内接种4次后,建立了裸鼠致瘤率依次提高的细胞系,并应用DIGE技术成功的制备了不同致瘤率的HL-60细胞系的差异表达的双向凝胶,掌握了蛋白质组学研究的基本方法。2.利用DIGE技术初步筛选、鉴定并分析了多个致瘤性相关的差异表达蛋白质,其中蛋白质hnRNP H、GSTπ,enolase 1是HL-60细胞裸鼠致瘤率提高的最关键因素。随着裸鼠致瘤率的提高,hnRNP H依次在各代细胞中表达上调,而GSTπ和enolase 1表达下调,表明,这些蛋白质在HL-60细胞的裸鼠致瘤性的发生、发展过程中起到促进或抑制性的作用。对这些蛋白的深入研究,可以为了解白血病细胞裸鼠致瘤性的发生、发展提供依据。
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