论文摘要
研究背景：肝肿瘤是人类最常见最难治疗的恶性肿瘤之一，因其病情发展快，死亡率极高，素有“癌中之王”之称。我国每年约有11万人死于肝肿瘤，占全世界肝肿瘤死亡数的55％左右，因此，肝肿瘤的诊治在世界范围内具有举足轻重的地位。一直以来，国内外许多学者都在积极探索肝肿瘤治疗的有效方法，目前药物治疗仍是其重要的治疗手段之一，但迄今为止，尚无实质意义上抗肝肿瘤的高效、低毒、价廉而理想的药物投入临床应用，近年来研究表明，中药治疗原发性肝癌取得了可喜的成果，其在改善患者的生存质量、延长生存期、控制病情发展等方面起到重要作用，日益受到重视和肯定。为此，国内外不少学者将研究重点转向中药抗肝肿瘤的研究。柴胡皂甙d（SSd）是从传统中药柴胡中分离、提取出来的药理活性最强的成分之一，通常认为具有解热、镇痛和抗炎等药理作用，近年研究表明，SSd通过直接细胞毒作用，影响肿瘤细胞黏附及诱导细胞凋亡等途径，抑制或杀死人肺癌、胃癌、肝癌、白血病细胞和小鼠移植性S-180实体瘤等肿瘤细胞。如：有实验证实SSd具有干扰白血病细胞株HL-60S期DNA合成，干扰蛋白质代谢，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡的作用；还对人肝癌细胞株SMMC-7221具有增殖抑制和凋亡诱导作用等。由此可见，柴胡皂甙d（SSd）有较强的抗肿瘤活性，加之其低毒、价廉，因此，柴胡皂甙d（SSd）可望做为一种抗肿瘤的良药在临床得到广泛的应用。目前关于SSd抗大鼠肝癌动物实验的研究国内外尚无相关文献报道，本实验采用二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌模型，进行SSd抗肝肿瘤的实验研究。研究目的：采用二乙基亚硝胺制作大鼠肝癌模型，观察探讨柴胡皂甙d（SSd）对大鼠实验性肝癌的抑制作用和免疫功能的调节，为开发应用柴胡皂甙d（SSd）防治肿瘤提供科学的理论依据。研究方法：1、大鼠肝癌模型制备及药物干预：选取清洁级雄性SD大鼠90只，随机分为5组，分别为空白对照组、单纯造模组、SSd大剂量组（2．0 mg／kg）、SSd中剂量组（1．5 mg／kg）、SSd小剂量组（1．0 mg／kg），模型组、SSd大、中、小剂量组均给予2g／LDEN灌胃，按照10 mg／kg体重给药，5次／周，16周后停药。同时SSd大、中、小剂量组以SSd腹腔注射，分别按2．0 mg／kh、1．5 mg／kg、1．0 mg／kg体重给药，7次／周，16周后停药。正常对照组以等量生理盐水灌胃，5次／周，16周后停药，同时腹腔注射等量蒸馏水，7次／周，16周后停药。2、血清学指标测定：实验第18周，处死所有大鼠取血清，用自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）等肝功能指标。3、大鼠免疫功能测定：应用流式细胞仪测定大鼠外周血T淋巴细胞亚群（CD3+CD4+％、CD3+CD8+％及CD3+CD4+／CD3+CD8+比值）。4、肉眼观察肝脏变化，留取肝组织固定包埋，制成切片，HE染色比较各组大鼠肝组织病理变化；同时电镜观察各组肝组织超微结构变化。5、用免疫组化的方法检测各组大鼠肝组织中IGF-Ⅱ和MMP-2的表达情况。实验数据应用SPSS13．0统计软件进行统计学处理。研究结果：1、实验第18周收集大鼠血清检测肝功指标结果可见，与正常对照组比较，肝癌模型组大鼠的ALT、AST、ALP、GGT、AFU明显升高，差异有统计学意义（P<0．05）；SSd中、小剂量组中各项肝功指标较肝癌模型组降低，差异有统计学意义（P<0．05），尤其是在SSd大剂量组（P<0．01）。2、光镜观察病理结果显示，镜下可见正常对照组大鼠无1例出现自发性肝癌，肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，细胞核清晰；肝癌模型组正常肝小叶结构被破坏，大体观白色结节处为肝癌细胞，根据1954年Edmondson分级法多为Ⅲ级；SSd各组镜下癌细胞分化程度高，异型性低，分级多为Ⅰ-Ⅱ级。3、肝癌模型组与正常对照组T淋巴细胞亚群比较CD4+、CD4+／CD8+明显下降，CD8+上升，差异有统计学意义（P<0．05）；而SSd各组与肝癌模型组T淋巴细胞亚群比较CD4+、CD4+／CD8+明显回升，CD8+下降，差异有统计学意义（P<0．05）。4、电镜观察单纯造模组大鼠出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和大量的脂滴，线粒体肿大，粗面内质网扩张，HSC及Kupffer细胞增生活跃、体积增大，部分细胞结构不清晰，SSd各组肝细胞内偶见脂滴，线粒体无明显肿胀，内质网增生，HSC细胞体积不大，Kupffer细胞脂滴不多。5、正常对照组未见IGF-Ⅱ和MMP-2阳性表达，而肝癌模型组和SSd各治疗组均可见呈棕黄色颗粒的IGF-Ⅱ和MMP-2阳性灶，两种细胞因子均主要定位于细胞浆内，少数细胞出现胞核着色，细胞膜未见着色。检测结果经统计学检验，肝癌模型组的IGF-Ⅱ和MMP-2表达高于SSd各治疗组，而SSd各治疗组间无显著性差异。结论：1、SSd对DEN大鼠肝癌的肝功能有一定的改善作用。2、SSd可有效减轻DEN致大鼠肝癌肝脏病理学的改变以及肝脏超微结构的改变。3、SSd对实验性肝癌大鼠的免疫功能有一定的改善作用。4、SSd对实验性肝癌大鼠的形成有一定的抑制作用，其机制可能与SSd下调肝癌中IGF-Ⅱ和MMP-2的表达密切相关。
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