肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体mRNA表达的发育性变化及营养调控

论文摘要

为了比较生产性能不同的两类肉鸡营养吸收转运载体mRNA表达的差异,本研究探讨了岭南黄肉鸡与Arbor Acre （AA）肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体mRNA表达的发育性变化及其差异,以及营养对肠道碱性氨基酸转运载体基因表达的调控作用。设计了2个试验,比较了AA肉鸡与岭南黄肉鸡生产性能和氨基酸消化率的差异,研究了肠道碱性氨基酸转运载体mRNA表达的组织特异性以及其在不同基因型肉鸡十二指肠、空肠和回肠表达的发育性变化及差异,研究了小麦型饲粮中添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡氨基酸利用率和肠道碱性氨基酸转运载体基因表达的影响。1.试验一选用160只0 d父母代AA公鸡和160只0 d父母代岭南黄公鸡,分别按照体重均分为4个重复,在相同条件下分两阶段饲养。记录并计算1～8w各周的平均日采食量（ADFI）和平均日增重（ADG）;在16d和30d,每个重复采集2只接近平均体重肉鸡的回肠食糜,测定回肠氨基酸表观消化率;在16d、30d和44d,每个重复选取2只接近平均重肉鸡,采集肠系膜静脉血清,测定其中各氨基酸含量;在30d采集岭南黄肉鸡十二指肠、空肠、回肠和结直肠组织样,用相对定量RT-PCR方法测定不同肠段碱性氨基酸转运载体rBAT、y+LAT2、CAT1和CAT4 mRNA表达的相对丰度;分别在2d、16d、30d、44d和58d采集岭南黄肉鸡和AA肉鸡十二指肠、空肠和回肠组织样,用相对定量RT-PCR方法测定不同肠段rBAT、y+LAT2、CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化,结果如下:（1）1～8w各周内,AA肉鸡ADFI、ADG都极显著高于岭南黄肉鸡（P<0.01）,耗料增重比（F/G）显著低于岭南黄肉鸡（P<0.05）;1～4w（换料前）,岭南黄肉鸡和AA肉鸡ADFI直线上升,5～6w呈现为平台期,7～8w ADFI显著增加,换料影响肉鸡的采食量;AA肉鸡和岭南黄肉鸡ADG的变化曲线在前期具有相同的趋势,1～3w,ADG呈直线上升,AA肉鸡的增重速度是岭南黄肉鸡的2.21倍,而4～8w,ADG增加缓慢,AA肉鸡的增重速度是岭南黄肉鸡的1.75倍。AA肉鸡前期的生长优势更明显;整个生长期内,AA肉鸡的ADFI是岭南黄肉鸡的1.48倍,ADG是岭南黄肉鸡的1.75倍,F/G是岭南黄肉鸡的0.84倍。（2）16d和30d时,AA肉鸡回肠氨基酸表观消化率有高于岭南黄肉鸡的趋势（Met、Cys除外）,但差异不显著。16d和30d时,AA肉鸡总氨基酸回肠表观消化率分别比岭南黄肉鸡高4.17%和4.63%;16d时,AA肉鸡肠系膜静脉血清中氨基酸的总含量显著高于岭南黄肉鸡（P<0.05）。30d时,两品种肉鸡肠系膜静脉血清中氨基酸含量差异不显著（P>0.05）。44d时,AA肉鸡和岭南黄肉鸡肠系膜静脉血清中各种氨基酸的含量均差异不显著（P>0.05）,但是岭南黄肉鸡总氨基酸含量显著高于AA肉鸡（P<0.05）;58d时,两品种肉鸡肠系膜静脉血清中总氨基酸含量差异不显著（P>0.05）;16～58d,AA肉鸡和岭南黄肉鸡肠系膜静脉血清中氨基酸总含量随时间逐渐降低,不同时间点的差异均达到显著水平。（3）岭南黄肉鸡肠道rBAT和y+LAT2 mRNA表达的组织特异性一致。结直肠rBAT和y+LAT2 mRNA的表达丰度均极显著低于十二指肠、空肠和回肠（P<0.01）,回肠的表达丰度高于空肠、十二直肠（P>0.05）。CAT1与CAT4 mRNA表达的组织特异性类似,显著不同于rBAT和y+LAT2,结直肠CAT1和CAT4 mRNA的表达丰度极显著高于十二指肠、空肠和回肠（P<0.01）。回肠CAT1 mRNA表达丰度极显著高于空肠和十二指肠（P<0.01）。十二指肠、空肠和回肠CAT4 mRNA的表达丰度依次降低,但相互之间无显著差异（P>0.05）。（4）肉鸡十二指肠碱性氨基酸转运载体rBAT、y+LAT2、CAT1、CAT4 mRNA表达的发育性变化分别与空肠的接近,与回肠的有较大差异;肉鸡十二指肠和空肠rBAT mRNA表达的发育性变化与y+LAT2比较一致,且与肉鸡的每周ADG和ADFI的变化曲线具有一定的相关性,两基因的mRNA表达丰度在2～30d有升高的趋势,44d下降,58d回升。44d和58d表达丰度降低可能是换料应激和饲粮蛋白水平降低所致。岭南黄肉鸡rBAT和y+LAT2 mRNA表达丰度的发育性变化幅度小于AA肉鸡。2～30d AA肉鸡rBAT、y+LAT2 mRNA表达丰度均高于或者显著高于岭南黄肉鸡;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT1、CAT4 mRNA表达的发育性变化与AA肉鸡分别有显著差异。岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT1 mRNA表达丰度从2～58d逐渐降低,而AA肉鸡除在44d有所降低,在其它时间点的表达丰度基本一致。岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT4 mRNA的表达丰度在2～44d有降低的趋势,58d有所回升,AA肉鸡在58d时最低,其它时间点的表达丰度基本一致;岭南黄肉鸡回肠rBAT、y+LAT2、CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化分别与AA肉鸡有显著差异。岭南黄肉鸡回肠rBAT和y+LAT2 mRNA的表达丰度在后期（30～58d）均高于前期（2～16d）,AA肉鸡rBAT、y+LAT2 mRNA表达丰度在58d显著高于其它时间点,在16d时最低。岭南黄肉鸡回肠CAT1 mRNA的表达丰度在2～44d逐渐降低,58d和44d接近,而AA肉鸡则在58d达到最高,其它时间点接近。岭南黄肉鸡回肠CAT4 mRNA表达的发育性变化在2～44d与AA肉鸡一致,而在58d时AA肉鸡CAT4 mRNA表达丰度继续降低,岭南黄肉鸡的表达丰度却显著上升。试验一结果表明,AA肉鸡的生产性能、氨基酸消化率高于岭南黄肉鸡。两品种肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体的发育性变化有差异。2.试验二选用发育正常的0d父母代岭南黄肉鸡720只,随机分为A、B、C 3组,每组6个重复,每个重复40只鸡。A组饲喂小麦基础饲粮,B组饲喂小麦基础饲粮+木聚糖酶（木聚糖酶的添加量为0.1%,原酶的酶活≥12000U/g）,C组饲喂玉米豆粕饲粮。各组饲粮营养水平相同。记录并计算了1～8w各周的ADFI、ADG。在16d、30d,每个重复选取2只接近平均体重的肉鸡,采集回肠食糜。在16d、30d、44d,每重复选取2只接近平均体重的肉鸡,采集肠系膜静脉血清,测定回肠氨基酸表观消化率和血清中氨基酸含量;16d时,采集A、B组空肠和回肠组织样,用相对定量RT-PCR方法测定两组肉鸡不同肠段rBAT、y+LAT2、CAT1、CAT4 mRNA表达的相对丰度。结果如下:（1）小麦型饲粮添加木聚糖酶使岭南黄肉鸡试验末平均体重提高4.4% （P<0.05）,ADG提高4.7%（P<0.05）,F/G下降3.2%（P<0.05）,对于采食量没有影响。在相同营养水平下,饲喂小麦型饲粮添加木聚糖酶组的岭南黄肉鸡的生产性能达到饲喂玉米豆粕型饲料组的水平。（2）小麦型饲粮添加木聚糖酶,岭南黄肉鸡16d时各种氨基酸的回肠表观消化率在数值上均有不同程度的提高,总氨基酸的回肠表观消化率提高了3.5%（P>0.05）;30d时,各种氨基酸的回肠表观消化率在数值上均有不同程度的提高,总氨基酸回肠表观消化率提高了3.0%（P>0.05）;小麦型饲粮添加木聚糖酶后,各种氨基酸的回肠表观消化率与玉米豆粕型饲粮无显著差异。（3）小麦型饲粮添加木聚糖酶,对肉鸡16d时肠系膜静脉血清中多种氨基酸的含量都有提高的作用,其中赖氨酸、组氨酸和总氨基酸含量达到显著水平（P<0.05）。对30d和44d肠系膜静脉血清中氨基酸含量没有显著影响。（4）小麦型饲粮添加木聚糖酶,显著提高了岭南黄肉鸡空肠rBAT和CAT4 mRNA的表达丰度（P<0.05）,对空肠y+LAT2 mRNA和CAT1 mRNA的表达丰度有提高的趋势（P>0.05）;对回肠rBAT mRNA的表达丰度没有影响,对回肠y+LAT2、CAT1和CAT4 mRNA的表达丰度有提高的趋势（P >0.05）。试验二表明,木聚糖酶可提高饲喂小麦型饲粮岭南黄肉鸡的生产性能和氨基酸消化率,对空肠部分碱性氨基酸转运载体mRNA的表达有上调作用。

论文目录

• 摘要
• 前言
• 第一章 岭南黄肉鸡和AA肉鸡生产性能的发育性变化及比较
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及分组
• 1.2 日粮组成和营养水平
• 1.3 饲养管理
• 1.4 生产性能指标
• 1.5 数据统计与处理方法
• 2 结果与分析
• 2.1 岭南黄肉鸡和AA肉鸡不同时期的生产性能
• 2.2 岭南黄肉鸡和AA肉鸡各周ADFI变化比较
• 2.3 岭南黄肉鸡和AA肉鸡每周ADG变化比较
• 2.4 岭南黄肉鸡和AA肉鸡生长曲线
• 2.5 岭南黄肉鸡和AA肉鸡每周饲料转化效率的变化比较
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 岭南黄肉鸡与AA肉鸡氨基酸消化率及肠系膜静脉血清氨基酸含量的比较
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及分组
• 1.2 日粮组成和营养水平
• 1.3 饲养管理
• 1.4 血清及食糜样品的采集
• 1.5 回肠食糜氨基酸表观消化率及血清氨基酸含量的测定
• 1.6 数据统计与处理方法
• 2 结果与分析
• 2.1 岭南黄肉鸡与AA肉鸡16d、30d回肠氨基酸表观消化率的比较
• 2.2 岭南黄肉鸡和AA肉鸡不同日龄肠系膜静脉血清氨基酸含量的比较
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体m RNA表达的组织特异性
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物与样品采集
• 1.2 相对定量RT-PCR（semi-quantitative RT-PCR）
• 1.3 数据分析
• 2 结果
• 2.1 RNA提取结果
• 2.2 RT-PCR产物测序结果
• 2.3 岭南黄肉鸡肠道rBAT mRNA表达的组织特异性
• +LAT2 mRNA表达的组织特异性'>2.4 岭南黄肉鸡肠道y⁺LAT2 mRNA表达的组织特异性
• 2.5 岭南黄肉鸡肠道CAT1 mRNA表达的组织特异性
• 2.6 岭南黄肉鸡肠道CAT4 mRNA表达的组织特异性
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体m RNA表达的发育性变化
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物与样品采集
• +LAT2、CAT1、CAT4 的相对定量RT-PCR'>1.2 目的基因rBAT、y⁺LAT2、CAT1、CAT4 的相对定量RT-PCR
• 1.3 数据分析
• 2 结果
• 2.1 AA肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠碱性氨基酸转运载体m RNA表达的发育性变化
• 2.2 AA肉鸡和岭南黄肉鸡空肠碱性氨基酸转运载体m RNA表达的发育性变化
• 2.3 AA肉鸡和岭南黄肉鸡回肠碱性氨基酸转运载体m RNA表达的发育性变化
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 小麦型饲粮添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡生产性能及氨基酸消化率的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及分组处理
• 1.2 日粮组成和营养水平
• 1.3 饲养管理
• 1.4 生产性能指标
• 1.5 血清及食糜样品的采集
• 1.6 回肠表观氨基酸消化率及血清氨基酸含量的测定
• 1.7 数据统计与处理方法
• 2 结果
• 2.1 木聚糖酶对岭南黄肉鸡各个时期生产性能的影响
• 2.2 木聚糖酶对岭南黄肉鸡回肠表观氨基酸消化率的影响
• 2.3 木聚糖酶对岭南黄肉鸡不同时期肠系膜静脉血清氨基酸含量的影响
• 3 讨论
• 4 小结
• 第六章 小麦型饲粮添加木聚糖酶对肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物与样品采集
• 1.2 相对定量RT-PCR（semi-quantitative RT-PCR）
• 1.3 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡空肠和回肠rBAT mRNA表达的影响
• 2.2 添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡空肠和回肠y+LAT2 mRNA表达的影响
• 2.3 添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡空肠和十二指肠CAT1mRNA表达的影响
• 2.4 添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡空肠和回肠CAT4 m RNA表达的影响
• 3 讨论
• 4 小结
• 总体讨论
• 1 岭南黄肉鸡与AA肉鸡生产性能与氨基酸消化率的比较
• 2 岭南黄肉鸡与AA肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体mRNA表达的发育性变化比较
• 3 小麦型饲粮添加木聚糖酶对岭南黄肉鸡氨基酸消化率的影响及其机理
• 结论
• 创新点
• 致谢
• 参考文献
• 英文摘要
• 附录A：文献综述
• 第一部分 动物肠道氨基酸转运载体研究进展
• 第二部分 营养与基因表达
• 第三部分 小麦饲粮中的木聚糖及木聚糖酶的应用
• 附录B：扩增序列测定图谱
• 附录C：在学期间参加的科研课题、学术活动及发表的论文
• 附录D: 华南农业大学毕业研究生对学位论文的承诺书