人TRAb单链组合文库的构建

论文摘要

目的: Graves病（Graves Disease,GD）是一种器官特异性自身免疫性疾病,是在环境因素与遗传因素相互作用下,机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的疾病状态。促甲状腺激素受体抗体（TSH receptor antibody,TRAb）是异质性的抗体,可通过细胞内不同信号转导途径影响细胞增殖与功能,是GD发病的一个重要因素,然而至今人们尚不了解TRAb家族结构上的差异对其疾病发生及病理改变的影响。为了从基因水平进一步深入探讨不同抗体免疫分子在自身免疫性疾病中的作用,本文通过基因抗体工程技术拟构建人TRAb-scFv噬菌体抗体库,以期最终获得有功能的TRAb片段（scFv形式）,为最终筛选出甲状腺刺激性抗体（thyroid stimulating antibody,TSAb）、TSH阻断（结合）性抗体（TSH-binding antibody,TBAb）基因片段打下基础。 方法: 取Graves病患者（TRAb、TSI经酶免测定药盒测定为强阳性结果）静脉血,分离血中单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,提取mRNA,反转录合成cDNA第一链。以cDNA为模板,利用多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术,扩增Graves病患者样品单个核细胞中抗体可变区编码基因VL（VL有两种型别:Vκ及Vλ,本文为Vλ）和VH片段。 将轻链可变区基因Vλ经纯化、酶切,插入噬菌粒表达载体p3SCMH中,形成p3SCMH/Vλ重组克隆噬菌粒,并将此重组克隆噬菌粒电转化入E.coliXL1-Blue中,构建轻链可变区基因子库。 将VH片段和pUCm-T载体连接建立VH子库。将重链可变区基因VH经纯化、酶切,插入轻链可变区基因子库中,形成p3SCMH/Vλ-linker-VH重组克隆噬菌粒,并将此重组克隆噬菌粒电转化入E.coli XL1-Blue中,构建单链抗体噬菌体抗体库,从而将轻链和重链可变区基因Vλ和VH用含15个氨基

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 人TRAb-scFv噬菌体抗体库构建策略
• 主要材料与仪器
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢